色谱分析时操作技巧

液相溶剂瓶小改进：

液相溶剂瓶原装盖上有两个小孔，一直担心空气当中的悬浮颗粒会落入瓶中，污染流动相，为了避免污染，又防止出现内外压差，对溶剂瓶做了如下小改进。

一、大一点的孔用一次性针筒过滤头堵上，另一小孔则先将一次性针筒过滤头套入一个塑料枪头再插入。

二、装水相的和有机相的溶剂瓶，分别选用无机相的和有机相的一次性针筒过滤头。

三、我曾经用空针筒套上过滤头推拉空气，测试无明显阻力，用在溶剂瓶上应该不会产生内外压差。

四、每三个月就更换一次，保证过滤空气效果，改进两年多来对液相运行无影响。

毛细管电泳法操作经验

1 断流的可能原因

a、有气泡。解决办法：所有进入毛细管的液体都要超声排气，特别是容易起气泡的溶液，如SDS。

b、有沉淀物。解决办法：所有进入毛细管的液体都要过滤，滤膜孔径要比毛细管内径小。

c、毛细管有裂口，容易裂的地方是窗口处和毛细管出口端，有时候看不出来，因为加压注水的时候仍能看到液滴出来，需要用手碰一碰才能发现。

2 基线漂移

a、毛细管没活化好：需要用0.1 M氢氧化钠多冲一冲

b、毛细管没平衡好：冲完氢氧化钠和水后需要用buffer再冲一段时间，这个时间得根据buffer的组成而定。必要时候需要跑空白一段时间。

c、灯接近寿命：查看灯的使用时间，如果已经两千多个小时接近三千小时的话，可以考虑换灯了。

d、毛细管寿命已到。毛细管是有使用寿命的，要看怎么保养，当然，还跟使用的buffer有关。有些buffer特别伤管子的。

3 常见缓冲溶液的使用

缓冲溶液一般是先配好stock solution，使用的时候再进行稀释。但是stock solution也不能长时间存放，0.1 M 的磷酸、硼砂等溶液常温下一个星期就会有变化，再长时间可以看到有沉淀析出。但是也不能因此放到冰箱去，因为放到冰箱也会有沉淀析出，尽量常温存放，然后每星期重配一次。另外，配置硼砂的时候要稍微加热帮助溶解，不然溶解不了。但加热也不要太猛烈，不然溶解效果也是不好。

4 sds使用注意事项

sds在配置过程中容易产生气泡，所以如果用容量瓶来配置是不实际的。这时候就不能对sds的浓度做精确要求。所以，一般用量筒或者离心管配置就好了，加水的时候用玻棒引流，小心的搅拌，边配置边超声促进溶解。

5 毛细管的使用和维护

避免用强碱溶液长时间冲洗，比如1 M氢氧化钠，内壁会被腐蚀的。长时间不用的时候应该吹干，两端密封保存。也有人建议用水封存。

6 UV灯的使用注意事项

不要暴力关电，要在操作界面按关灯键。一般不超过两小时暂停检测不需要关灯，因为开关灯都是会对灯造成损害的。

色谱柱的清洗和修补技巧

1：用色谱甲醇做流动相，以1.00ml/min的流速，反向（只适用于色谱柱两端封口一致的色谱柱）冲洗一小时，不接检测器。

2：用异丙醇，以0.3ml/min的流速，反向冲洗三小时

3：再用甲醇，以1.00ml/min的流速，反向冲洗30分钟。

4：连接检测器，正向连接色谱柱，用流动性过渡，

5：基线平稳后，进样。进样色谱图。

采取措施：

1：挖去柱头污染的填料，大约1.5mm，挖去的污染填料。

2：用同种填料，湿法填平挖去的柱头填料，筛板用异丙醇超声15分钟，再用水超声5分钟，用滤纸擦干，上好柱头螺丝。

3：流动相冲洗30分钟，不连接检测器。

4：连接检测器，过渡平衡，进样。

  结论：根据色谱柱出现柱效降低，分离效果不好，严重拖尾，影响正常检测的情况，进行了反向冲洗，以及修补，效果还是可以的，再者：对于使用效果不好的色谱柱，要根据情况作相应的处理，如果通过清洗能解决问题的一般不要修补，清洗不能达到使用效果的再进行修补。

进样针堵塞疏通技巧

   实验室的气相色谱分析时，进样针堵塞是常见的问题了，前几天做实验，载气流速都正常，柱子也刚老化过，出峰变低，怀疑是进样针有点儿堵了，烧了个热水，用开水把进样针的针头给烫一下，然后再用针吸几下热水，完了之后再进样试试，发现进样还算正常了！用开水煮的话可能效果会更好！

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