使用沃特世ACQUITY UPLC I-Class分析饲料中的抗球虫剂

应用优势：使用沃特世ACQUITY UPLC ® I-Class高效液相色谱系统和Xevo ® TQ-S开 发出一种检测饲料样品中的11种抗球虫剂 的快速、稳健、准确和灵敏的方法。 ■ 与原有HPLC/MS-MS方法相比，饲料样品提 取物可进一步稀释50倍，进样体积只有 原来一半。 ■ 运行时间从16 min（HPLC/MS-MS）缩短至 8 min（UPLC/MS-MS）。 ■ RADAR™能够提供关于基质效应的相关信 息，因此是方法开发的一种重要工具。

 简介： 球虫病是一种由原生动物球虫引起的动物肠道寄生虫病。这种疾病通 过接触受感染的粪便或摄入受感染的组织在动物之间传播。主要症状 为腹泻，严重时变为便血。大多数动物感染球虫后无症状；但是动物 幼体或免疫力低下的动物可能会出现包括死亡在内的严重症状。其中 家养动物、工业化饲养的家禽和兔子为易感群体。 目前，根据欧盟法规2003/1831/EC，11种抗球虫剂经批准可作为饲料添 加剂。其它一些法规还规定了可用于特定动物物种的抗球虫剂。由于 饲料公司常会用同一生产线生产不同的饲料，因此难以避免残留的抗 球虫药发生批次间转移。饲料公司本身努力避免交叉污染，并且欧盟 发布指令2005/183/EC规定了抗球虫药的大残留浓度（2009/8/CE）以 保护动物健康并将对消费者的风险降至低。该指令规定饲料的大 残留浓度：用于敏感动物物种的为1 %，相对不敏感的非标靶动物物种 为3 %。表1中示出的所需LOQ水平取决于药物，根据提取方案做进一步 限定。这些LOQ浓度差异较大，难以在一次多残留分析中，分析所有组 分并实现良好的灵敏度、准确度和线性范围。 此外，饲料是非常复杂的混合物。通常情况下无法对每种饲料使用基 质匹配校准法或标准品加入法，而是采用内标法和只对某一种饲料基 质。基于同种饲料基质，在不同浓度下进行加标回收率实验，以验证 方法的准确度。

 *，基质可显著改变电喷雾电离的响应，可能使信号增强，但更可能的是抑制信号。 通过减少源区中基质离子的量可以使基质效应小化。一种途径是通过稀释样品实现（如 果所用的方法足够灵敏，则此途径可行），使得加载到色谱柱上的基质减少，在常规食品和饲 料检测实验室工作时也无需频繁清洗仪器，从而延长了仪器的正常工作时间，提高了方法的稳 健性。

本应用纪要介绍了一种快速、准确且稳健的UPLC/MS-MS方法，该方法利用Waters ® ACQUITY UPLC I-Class和Xevo TQ-S系统检测饲料中残留浓度低至0.25 %的11种抗球虫剂。Xevo TQ-S是一种高灵敏的 串联四极杆仪器，具有快速转换正/负离子的功能，能够应对颇具挑战性的基质。

实验 样品制备 本方法参考先前应用于HPLC-MS-MS的方法，对其进行了适当的转换以用于UPLC ®，除此之 外还包括终的稀释步骤。 1. 称取5 g研磨均匀的饲料样品，放至50 mL一次性离心管中。 2. 加入50 µL内标混合溶液（50 µg/mL氯苯胍-d8、尼日利亚菌素，25 µg/mL DNC-d8，5 µg/mL 地克珠利-bis、癸氧喹酯d5）。 3. 加入10 mL 10 % Na2CO3溶液，手动振荡。 4. 加入15 mL乙腈。 5. 振荡30 min。 6. 在2000 rpm （4 ℃）下离心5 min。 7. 将上清液转移至50 mL试管中。 8. 再次用乙腈提取，合并两次所得的有机提取物。 9. 将1 mL提取物转移至玻璃管中，并用初始流动相将样品稀释50倍。

UPLC条件 系统： ACQUITY UPLC I-Class 色谱柱： ACQUITY BEH C18 2.1×100 mm 柱温： 50 ℃ 样品温度： 10 ℃ 进样： 10 µL 流动相： A 0.1 %甲酸水溶液 B 0.1 %甲酸和甲醇混合液 梯度如表2所示。 MS条件 MS系统： Xevo TQ-S 极性： ES +/- 毛细管电压（kV）： ES+为1.00， ES-为3.00 源温度： 150 ℃ 脱溶剂气温度： 500 ℃ 锥孔气体流速： 150 L/h 脱溶剂气流速： 1200 L

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结论 利用ACQUITY UPLC I-Class/Xevo TQ-S系统，开发出一种快速、 稳健、准确和灵敏的分析方法，用于检测饲料样品中11 种抗球虫药。与原有HPLC/MS-MS方法相比，饲料样品提取 物可稀释50倍，进样体积只需原来的一半。这使清洗仪器 的频率降低，延长了仪器的正常运行时间，提高了检测的 可靠性。RADAR功能能够提供关于基质效应的信息，是方 法开发的一种重要工具。