测定氨基酸的方法有哪些？

1、双指示剂甲醛滴定法（测定游离氨基酸）

有单指示剂滴定法、双指示剂滴定法。

单指示剂有：百里酚酞,酚酞。双指示剂有：中性红—百里酚酞。

其原理均是用甲醛与NH2作用，使碱性消失，再用强碱滴定COOH。

测定：①样品（溶液）（20—30mg氨基酸+H2O+3滴中性红，用0.1N NaOH滴定至黄橙色 （V1）②样品+中性甲醛+3滴百里酚酞，摇，静1min，用0.1N NaOH滴定至淡蓝色 （V2）。

计算： 氨基酸态氮（%）= [（V2－V1）×C×0.014]/W*100

式中：V1——用中性红作指示剂滴定时消耗氢氧化钠的体积,V2——用百里酚酞作指示剂滴定时耗氢氧化钠的体积。

2、电位滴定法

（1）原理：加入甲醛，固定氨基碱性。用酸度计指示滴定终点，据加入甲醛后耗用NaOH量计算蛋白质％。

适用于混浊及色深样品的直接滴定。

（2）测定：①样液用NaOH滴定至pH=7.5～8.2。

②加入中性20％甲醛后，用NaOH滴至pH=9.2。

③同时作空白试验。

（3）计算：

3、茚三酮比色法

（1）原理

氨基酸在碱性溶液中能与茚三酮作用生成蓝紫色化合物，λmax=570nm其颜色深浅与氨基酸含量成正比。

（2）测定

①准确吸取100μg/ml氨基酸标准溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml至比色管中，补加水至相同体积。加入茚三酮、磷酸缓冲液各1ml，水浴中加热15min。加水至（或转入容量瓶中）25ml，静置15min。在570nm下以空白液为参比液，测A，绘制标准曲线。

②样品测定

吸取样液1～5ml，用同样条件下测A，查出氨基酸μg。

（3）计算

                                                 X

氨基酸总量（mg％）= ---------------×100

                                          m×1000