影响液相色谱分离效果的因素！

                   影响液相色谱分离效果的因素！

百欧博伟生物：液相色谱在进行分析检测的过程中，有一个非常重要的步骤：分离，影响液相色谱分离效果的主要因素有哪些？除流动相和固定相的因素外，与样品性质也有很大关系。

流动相因素

1、流动相pH

不同基质的填料具有不同的pH适用范围。常温下无定形硅胶在纯水中的溶解度约为100mg·L-1，且在pH 1～9的范围内溶解的硅胶量几乎是常量，考虑到溶解速度的影响，对于硅胶基质的填料，其所能承受的流动相pH范围约为1～8。

键合相硅胶填料则由于键合层的屏蔽作用，使填料对流动相的适应范围大大增加，如现在广泛使用的反相色谱填料C18 (十八烷基硅烷键合硅胶)，其pH适用范围可达2～10。当流动相pH值超出酸性范围时，键合相易发生水解而流失；当流动相pH超出碱性范围时，会加速硅胶的溶解而释放出絮状物堵塞柱子，这两种反应均是不可逆反应，特别是在温度较高（>40℃）的环境下，会使柱效迅速降低而报废。

2、流动相变质

当前使用广泛的是硅基键合相填料，当以水溶液作为流动相或流动相中含有一定浓度的磷酸盐缓冲液时，水溶液中或缓冲盐溶液中会滋生出一些细菌或霉菌，从而堵塞固定相颗粒间的空隙。特别是对于多元自动比例混合的高效液相色谱仪来说，水相或缓冲盐相独立存贮，因存放时间较长而容易发生此类问题。

3、流动相纯度　

目前，广泛使用的填料颗粒粒径范围在3～10μm，孔径在6～10nm，色谱柱在使用中会有大量的流动相通过，如流动相含有微量不溶性杂质颗粒，则很容易在柱头部位被截留，久而久之，造成色谱柱机械性堵塞，引起柱压升高而无法正常使用。

4、其它因素

如，流动相的极性对柱子也有一定影响，甲醇、水、冰醋酸等极性较大的物质会破坏硅胶填料柱，正丁醇、二氯甲烷等极性小的物质会破坏化学键合硅胶柱，碱性溶液会破坏阳离子交换树脂色谱柱，酸性溶液容易损坏阴离子交换树脂柱。

二、样品因素

1、样品的溶解性　

样品试样在配置中，如有少量微粒未能*溶解，则会随试样一起进入色谱柱，同样，会沉积在柱头处，造成色谱柱的堵塞。

2、样品的纯度　

样品中可能含有待分析组分以外的各种组分或杂质，这些组分或杂质可能会在柱内产生不可逆吸附，从而，使固定相的活性点被覆盖，保留特性发生变化。

3、样品的化学性质

待测试样中的各种组分与填料之间应具有化学稳定性，比较典型的是在使用氨基键合柱时，应避免使用含羰基的化合物和流动相，如，丙酮、乙酸乙酯等，以免固定相中的NH2和酐、酮发发希夫(Schiff)缩合而使固定相破坏。

三、其它因素

影响色谱柱寿命的因素很多，除流动相和样品因素外，还有其它一些外在因素，如，柱压的影响，温度的影响，色谱柱的正确冲洗，色谱柱的正确安装等。