动物源性食品中孕激素类 药 物 残 留 LC-MS/MS 分析方法

背景近年来，食品安全事件频发，人们对食品中激素类残留尤为关注。孕激素类药物在畜禽养殖中可以提高饲料转化率，促进动物生长等作用，畜牧业中非法滥用孕激素类药物问题十分严重。我国农业部 176 号公告明确规定，禁止饲料和动物饮用水中添加炔诺醇，左炔诺孕酮、炔诺酮等孕激素，并在 235 号公告规定了甲羟孕酮等在动物源性食品中不得检出。

样品前处理方法提取称取 3 g( 精确至 0.01 g) 混匀的试样，置于 50 mL 具塞离心管中，加入 5 mL 乙酸 - 乙酸钠缓冲溶液，涡旋混匀，再加入 β- 葡萄糖醛酸 / 芳香基硫酸酯酶溶液 60 µL，于 37℃ ±1℃振荡酶解 12 h。取出冷却至室温，加入 20 mL 乙腈涡旋 5 min，超声提取 10 min，-10℃下 10000 r/min 离心 5 min, 将上清液转入另一个干净的 50 mL 离心管中，加入 20 mL 正己烷 - 二氯甲烷（v/v, 80:20），振摇 5 min，静置后，溶液分成上中下三层，吸取中间层（乙腈 + 二氯甲烷）溶液于梨形蒸发瓶中，40℃减压旋蒸至干，加入 0.5 mL 乙腈，5 mL 水，混匀后待净化。净化方法①固相萃取柱的准备：将 C18 固相萃取柱（500 mg,3 mL）置于固相萃取装置上，依次用 6 mL 甲醇和 6 mL 水活化。②样品净化：将上述样品提取液转移至活化过的 C18 固相萃取柱，控制流速约 1 滴 / 秒。依次用 5 mL10% 甲醇水溶液和 5 mL 水淋洗小柱，淋洗液*通过小柱后，加压抽至干，用 6 mL 甲醇洗脱，收集洗脱液于梨形蒸发瓶中，在 40℃真空旋转蒸发至近干，再用氮气流下吹干，加入 0.5 mL 乙腈溶解残渣，涡旋混合 1 min，加入 0.5 mL 水，混匀，过 0.22 µm 滤膜，供LC-MS/MS 测定

LC-MS/MS 仪器方法液相色谱参数液相色谱仪：PerkinElmer AltusTM A-30 UPLC® 系统，具体参数见表 1。

将标准溶液配制成工作液，使各个化合物浓度为 0.1~100 ng/mL，在本方法确定的实验条件下，获得标准曲线数据。以进样浓度为横坐标，定量离子的峰面积为纵坐标，建立标准曲线（图 2 及表 5）。由表 5 可见，各分析物标准曲线的相关系数均大于 0.99，相关性良好。在低浓度水平 0.1 ng/mL 下进行重现性实验，在连续 6 针进样下，获得优异的重现性结果，见表 5

结论PerkinElmer QSight 200TM 系统具有灵敏度高、重现性好、抗污染能力强等优点，在检测动物源性食品中孕激素残留*食品安全严格的法规要求