离子色谱测定替加环素中的叔丁胺和N-叔丁基甘氨酸

替加环素（Tigecycline）结构与四环素类药物相似，是一种新型广谱抗菌素，是首个被批准用于临床的静脉内给药的甘氨酰环素类抗生素。对有抗药性的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌有活性，FDA于2005年6月批准上市。叔丁胺（SDA）盐酸盐是替加环素的一种原料，本身具有较高的毒性，需要开发测定有关物质的方法；而N-叔丁基甘氨酸盐则是替加环素的重要中间体，也需要测定N-叔丁基甘氨酸在替加环素中的残留情况。

N-叔丁基甘氨酸同时有氨基和羧酸基团，是两性化合物；而叔丁胺的极性较大，这两种化合物在常规C18柱上均无法保留。淋洗液中加入离子对试剂可延长叔丁胺保留时间，但其本身无特征紫外吸收波长，采用末端吸收干扰较大，无法满足有关物质分析的要求。在酸性条件下，叔丁胺与酸成盐后带正电荷，可以采用阳离子分析柱分离后通过电导检测器检测。分析N-叔丁基甘氨酸可采用柱前衍生法使其在色谱柱上有保留，在紫外检测器中有响应，但操作繁琐，且可能受替加环素基体影响较大。采用阴离子交换安培检测方法测定N-叔丁基甘氨酸不需要衍生，且安培检测的灵敏度高，满足低含量有关物质分析的要求

（1）叔丁胺测定条件：仪器：离子色谱仪带电导检测器；色谱柱：IonPac CS17分析柱，7 µm，250×4 mm， P/N：060557； IonPac CG17保护柱，7 µm，50×4 mm， P/N：060560；柱温：30℃；流动相：梯度淋洗见表1-14；流速：1.0 mL/min；进样体积：25 µL；检测器：电导（电导池温度35℃），阳离子电解再生抑制器，自循环模式；谱图见1-25

（2）N-叔丁基甘氨酸测定条件：仪器：离子色谱仪带安培检测器色谱柱：AminoPac PA10分析柱，8.5 µm，250×2 mm，P/N：055406； AminoPac PA10保护柱，8.5 µm，50×2 mm，P/N：055407；柱温：30℃；流动相：梯度淋洗；条件参见表1-15，A：DI water；B：250 mmol/L NaOH；C：1000 mmol/L NaOAc；流速：1.0 mL/min；进样体积：25 µL；检测方式：脉冲安培检测（PAD），AAA Au电极，pH参比模式，氨基酸六电位波形；谱图见1-26