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推“柱”之荐|配方颗粒色谱柱推荐之鱼腥草

2022年08月05日 15:57 来源:安捷伦科技(中国)有限公司

在前几期,我们为大家介绍并推荐了适用于中草药检测的各类安捷伦色谱柱,以便大家在日后的检测工作中匹配使用。本期继续带来适用于鱼腥草配方颗粒检测的色谱柱推荐,跟上我们,精彩继续!


Agilent TC 和 HC C18 系列是 2005 年推出通用 HPLC 色谱柱,采用高纯硅胶、专有的键合及封端技术,具有较高的碳载量、比表面积和惰性表面;TC(2) 和HC(2) 为该系列的第二代产品,在硅胶去活、封端工艺方面做了优化,更有利于碱性化合物的分离和峰形改善。TC/ HC 系列在中药分析中有大量应用,配方颗粒国家标准的应用统计点击这里


根据国家药品监督管理局 《国家药品标准》中鱼腥草配方颗粒的检测项目,对其特征谱图和含量测定都采用 HPLC 方法。特征谱图及含量测定中要求理论板数按槲皮苷峰计算应不低于 3000。由于特征图谱的分析时间为 80 分钟,含量测定的时间也接近 20 分钟,耗时太长,仪器利用率很低,检测效率低下。本文先采用 Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱重现了国家标准方法,再使用 ZORBAX Eclipse Plus C18 RRHD, 2.1x100mm, 1.8μm 色谱柱,进行方法转换,在 1290 Infinity II 超高效液相色谱仪上实现了鱼腥草配方颗粒的特征谱图和含量测定 UHPLC 方法建立。


1 特征谱图

实验结果

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图 1. 鱼腥草配方颗粒国标对照谱图与替代方法中供试品特征谱图(包括 HPLC 方法和 UHPLC 方法)的比较 (峰 1:新绿原酸;峰 2(S):绿原酸;峰 3:隐绿原酸;峰 5:金丝桃苷;峰 6:槲皮苷)


由于峰 4 没有对照品,本实验比较了该峰在方法转换前后的光谱图,其光谱一致,见图 2 所示。

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图 2. 方法转换前后峰 4 的光谱对比



色谱条件:


标准方法:


流动相:A:乙腈;B:H2O(0.1%磷酸)

梯度:0-10 min,94 %-92%B;10-25 min,92%B-85%B;25-30min,85-84%B;30-45min,84-82%B;45-55min,82-73%B;55-75min,73-73%B;75-80min,73-94%B;后运行,7min

流速:1mL/min

柱温:30 °C

检测波长:0~30分钟为326nm,30~80分钟为254nm(采样频率:2.5Hz)

进样量:10 μL


转换后的UHPLC方法:

梯度:0-1.5 min,94 %-92%B;1.5-3.8 min,92%B-85%B;3.8-4.5min,85-84%B;4.5-6.8min,84-82%B;6.8-8.3min,82-73%B;8.3-12min,73-73%B;12-12.5min,73-94%B;后运行,3min

流速:0.6ml/min

柱温:30 °C

检测波长:0~4.5分钟为326nm,4.5~12.5分钟为254nm(采样频率:20Hz)

进样量:1 μL


系统适用性结果见下表:


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结果

1)使用 Agilent TC-C18 色谱柱,峰 1,3,4 的相对保留时间(RRT)和峰 5、6 的相对峰面积满足标准要求,能重现国标方法中的特征图谱。


2)使用 ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18 UHPLC 色谱柱,峰 4 的 RRT 超过标准要求的 10%, 但通过光谱显示,UHPLC 方法中峰 4 的光谱与 HPLC 方法中保持一致,综合研判,应为同一物质。


3) 转换成 UHPLC 方法后,分析时间缩短至 HPLC 方法的 16%。


2 含量测定


实验结果

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图 3. 鱼腥草配方颗粒供试品含量测定标准方法和 UHPLC 方法谱图对照



色谱条件:


标准方法:


流动相:A:乙腈;B:H2O(0.1%磷酸)

比例:A:B=23:77

流速:1mL/min(HPLC),0.6 mL/min(UHPLC)

柱温:30 °C

检测波长:254nm(4nm);采样频率:2.5Hz(HPLC), 20Hz (UHPLC)

进样量:10 μL(HPLC), 1 μL(UHPLC)


系统适用性及检测结果见下表:


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结果


1)使用 TC-C18 柱测定供试品中槲皮苷的含量,其理论板数符合标准规定。


2)通过 UHPLC 方法转换,系统适应性结果满足要求,检测效率提高 5 倍。


实验结论


本实验选用 TC-C18 HPLC 色谱柱,重现了鱼腥草配方颗粒特征谱图及含量测定方法,均符合标准要求。通过 UHPLC 方法转换后,使用 ZORBAX Eclipse Plus C18 RRHD 色谱柱,系统适应性试验、含量检测结果与 HPLC 结果一致,检测效率大大提高


仪器系统及色谱柱推荐

1260 Infinity II 四元 HPLC 系统:四元泵(G7111B),自动进样器(G7129A),柱温箱(G7116A),VWD(G7114A)


1290 Infinity II 四元 UHPLC 系统:全能泵(G7104A),自动进样器(G7129B),柱温箱(G7116B),DAD(G7117A)


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其它详细操作可以参考 Agilent 配方颗粒图谱集,或联系 Agilent。








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