三重四极杆液质联用仪用于亲脂性海洋贝类毒素的高灵敏度可靠分析

前言海洋生物毒素是海洋植物藻类产生的次生代谢物，其浓度一般很低。在藻类生长时，毒素的浓度可以达到有毒水平，特别是双壳类软体动物中毒素的积累。在过去的二十年中，有害藻类大量繁殖，其数量和强度都日益增加，大量的有毒化合物在海洋食物链中被发现 [海洋生物毒素。粮农组织食品和营养文件（80）2004]。由于欧盟现有的标准方法中，小白鼠生物法的高变异性、低检测能力和有限的特异性，欧洲食品安全局（EFSA）要求需要开发出更灵敏、更可靠的

您面对的挑战目前的挑战是需要寻找灵敏和可靠的分析方法用于海产品中亲脂性的海洋毒素的测定，这些海洋毒素包括大田软海绵酸（OA）、鳍藻毒素（DSP 毒素）、聚醚类毒素（如原多甲藻酸、蛤毒素和虾夷扇贝毒素）。这种方法应该能够扩展到亲脂毒素（如软骨藻酸、环亚胺毒素或螺旋内酯毒素）的进一步检测。欧盟立法规定检测限（LOD）应该低于原多甲藻酸、大田软海绵酸和鳍藻毒素和蛤毒素的总和以及虾夷扇贝毒素的最大残留（MRL）。基质使得痕量毒素的定量和确认分析更加复杂。由于很多标准品很难得到，所以只能根据其它的毒素进行定量分析。

我们的综合方法当前，海洋生物毒素的分析方法主要是基于物理化学技术，如液相色谱-串联质谱。三重四极杆质谱能大幅减少或消除基质的干扰。多反应监测（MRM）是根据待测物的母离子在碰撞反应池产生特征离子，然后采集这些特征离子来完成检测。而且，待测物母离子（MS1 设置成选择离子扫描模式）与单四极杆质谱的选择离子扫描的选择性相同，生成的子离子（MS2 的选择离子扫描模式）更有可能成为目标化合物的特征离子，这样的模式能够大大提高MRM 的选择性。特征的子离子组合（更高的选择性）和背景噪音的消除使得即使在复杂基质样品中也能得到更低的检测限。本文的方法中，使用安捷伦 6460 三重四极杆液质联用仪和多反应监测（MRM）、安捷伦 1200 SL 快速高分离液相色谱以及MassHunter 工作站软件，建立了贝类样品中亲脂性海洋生物毒素的高灵敏度和高选择性的分析方法。本文介绍的样品净化方法非常简单，因此很适合常规检测。它可以用于 OA、DTX-1、DTX-2 的分析，包括水解后的脂、YTX、OH-YTX、PTX-1、PTX-2、AZA-1、AZA-2 和 AZA-3。由于缺少某些商品化的毒素标样，因此使用 CopyCalibrationLevel.quant.script 对其它的毒素化合物进行定量分析。

方法和运行用于海洋生物毒素的现代分析方法是基于三重四极杆液质联用系统的技术。样品前处理很简单，只需要用溶液提取，然后过滤。液相色谱进行毒素的分离，然后用液相色谱-电喷雾离子源-串联质谱（MRM正/负模式）进行待测物的定量分析。分析步骤液相萃取高效液相色谱，线性梯度进行分离液相色谱-电喷雾离子源-串联质谱（MRM）用于毒素检测样品制备步骤称取 2 g 熟的研磨贝类。加入 9 mL 甲醇溶液（80%）。进行两次提取步骤。将两次提取液混合在一起，移至 50 mL 容量瓶。取一定体积的样品溶液，过滤（RC 0.45 µm），10 µL 样品进到液相色谱-串联质谱中进行分析。

液相色谱-串联质谱方法亲脂性海洋生物毒素的总分析时间小于30 min。分析方法中，对于 OA、DTX-1、DTX-2、PTX-1、PTX-2、AZA-1、AZA-2和 AZA-3 采用正离子模式。YTX 需要用不同的色谱柱和流动相另外进行分析。提取物（10 µL）直接进到液相色谱-串联质谱系统进行分析。对于液相色谱方法，正离子模式下用 0.1% 甲酸溶液（A）和甲醇（B）；对于负离子模式下用 2 mM醋酸铵溶液（A）和甲醇（B）。色谱柱（Phenomenex Luna 5 pm C18（2） 100 Å150 x 2.0 mm [正离子模式]，ZORBAXEclipse Plus C 8 4.6 x 75 mm 3.5 pm [负离子模式]），柱温为30 °C，流速为0.2 mL/min。

结论通过国际合作研究进行方法验证。合作研究是在 §64 LFGB 工作小组的“藻类毒素”框架下进行的，由联邦消费者保护和食品安全（BVL)办公室主办。