2蛋白溶液中人血白蛋白和EPO(重组人促红细胞生成素)的含

人血清白蛋白（人血浆白蛋白）存在于人体血浆中，占血清蛋白质的55-63%，是血清中少数不含糖的蛋白质之一，分子量67.5kD，由585个氨基酸残基组成的单链多肽，分子中含17个二硫键，等电点为4.9。具有增加血容量和维持血浆胶体渗透压、运输和解毒以及营养共给的功能。

EPO（重组人促红细胞生成素）由肾皮质肾小管周围间质细胞和肝脏分泌的一种激素样物质，能够促进红细胞生成。其为酸性糖蛋白，疏水性强，含有165个氨基酸，相对分子质量约为34 kD（30-39kD），其中糖链约占39%，两个链内二硫键，等电点为3.75-4.15。医疗用途：增加红血球的数目，用于贫血、组织断离等治疗；体育用途：增加训练耐力和训练负荷，属于国际奥委会规定的违禁药物。

本文采用离子交换液相色谱方法和空间排阻色谱法对人血白蛋白和EPO分离。各种不同分离方法色谱条件见表2-18，各分离模式下柱温均为30 ℃，进样量10 µL，检测波长280 nm。分析图谱见图2-25到2-26

（1）体积排阻色谱条件：色谱柱：Mab Pac SEC-1，5 µm，4.0×300 mm， P/N：074696流动相：1.5 mmol/L KH2PO4-3.2 mmol/L Na2HPO4-400 mmol/L NaCl，pH=7.3混合溶液流速：0.20 mL/min（2）离子交换色谱条件：色谱柱：MAb Pac WAX-10，10 µm，4.0×250 mm， P/N：054999流动相：A：10mmol/L Tris缓冲液pH=8.2； B：10mmol/L Tris缓冲液，1.0mol/L的NaCl，pH=8.2；流速：1.0 mL/min

梯度条件见表2-18；采用离子色谱法测定样品，保留时间和峰面积的重现性非常好，含量接近标示量。同时人血白蛋白和EPO分别在0.1-10 mg/mL和0.05-1.62 mg/mL范围内，线性关系较好，见附录结果。因此采用阴离子交换色谱柱ProPac WAX-10在色谱条件下能够对人血白蛋白和EPO进行很好分离分析。参照药典的方法，采用Mab Pac SEC-1色谱柱对EPO、人白和样品溶液进行分析，结果表明样品溶液中，低浓度的EPO峰和高浓度的人白色谱峰重叠在一起，无法进行很好分离，主要原因可能实验室色谱柱的体积排阻限比较宽（10-1000kD），建议采用体积排阻限符合药典的色谱柱，结果可能会比较好。