使用超高效液相色谱/三重串联四极杆质谱开发高通量生物分析方法

摘要：生物分析领域的快速 LC/MS/MS液相色谱 方法开发受多个因素影响，是一项艰巨的任务。为了在加快分析速度的同时保持高灵敏度，目标分析物不应该在受离子抑制影响的色谱保留范围内洗脱。质谱仪的扫描速度必须足够快，以获得足够多的数据点来明确表征由亚2µm 色谱柱分离得到的窄色谱峰。在典型的快速液相色谱条件下，产生的反压会接近甚至高于目前高效液相色谱系统（压力限 ≤ 400bar（5800psig））的反压限值。在本应用摘要中，我们采用 Agilent 1290 Infinity LC 系统与 Agilent 6460 三重串联四级杆质谱仪联用，采用热梯度聚焦 ESI（安捷伦喷射流技术，AJS）和添加了阿pu唑仑的人血浆基质（2nM 至 5000nM，相当于 0.06ng/mL 至 1544ng/mL）简化高通量生物分析方法的开发。100µL 的加标血浆样品采用三倍体积乙腈沉淀并离心。200µL 上清液用三倍体积 0.1% 甲酸（FA）水溶液稀释。每个样本重复进样三次。采用通用离子源数据对 AJS 技术和传统直角 ESI 技术进行了比较。Agilent 1290 Infinity LC 三重串联四极杆 MS/MS 系统，最高流速可达 2mL/min，最高压力可达 1200bar，驻留时间低至 1-2ms，相应地，分析时间不超过 0.5min，并且不会牺牲定量数据的质量。安捷伦的超高压快速高分离度色谱柱（RRHD）的柱效更高，可得到更窄的色谱峰，被分析物的色谱峰峰高显著增加，与基质组分分离，可提高被分析物的响应（灵敏度）。

仪器条件Agilent 1290 Infinity LC MS/MS 系统：Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统，包括带集成脱气机的二元泵，带温控系统的自动进样器和柱温箱。Agilent 6460A 三重串联四极杆 LC/MS 带 AJS 技术离子源或传统的直角 ESI 源。