在线净化分析检测黄连上清丸中的小檗碱

在分析基质复杂的样品时，萃取过程中干扰物质容易同目标化合物一起萃取出来，这些共萃取物干扰分析。通常需采用额外的净化步骤来对萃取液进行处理，如柱层析法、固相萃取法（SPE）、凝胶色谱法（GPC）等，以减少共萃取物的干扰。复方中药黄连上清丸基体组成复杂，主要组成药物17种，《中国药典（2010版）》对黄连上清丸中的小檗碱提取采用水浴，超声提取，浓缩提取液后过层析柱去除杂质，该方法操作复杂，耗时耗力。本方法采用In-cell cleanup ASE提取技术对复方中药黄连上清丸进行提取净化，取得了满意的效果。

仪器：ASE 350, 表5-13 ASE萃取条件ASE条件 参数溶剂 甲醇温度 140℃加热时间 7 min静态萃取时间 5 min循环次数 2吹扫体积 60%吹扫时间 90 s总体积 40 mL总时间 20 min前处理方法：取黄连上清丸水丸1 g，精密称定，加入硅藻土（DE）适量，研磨，混合均匀。在萃取池（22 mL）中垫入纤维素膜，加入5 g碱性氧化铝，填平；将混合均匀的样品加入萃取池中，加速溶剂萃取条件参见表5-13，萃取液定容，滤过，待HPLC分析。

HPLC条件 仪器： Ultimate 3000 HPLC 分析柱：Acclaim 120 C18，5 µm，4.6×250 mm ， P/N：059149；流动相：乙腈-33 mmol/L磷酸二氢钾溶液（35:65）柱温：30℃检测波长：270 nm进样量：10 µL

结果与讨论In-cell cleanup净化过程参考2010版药典，采用碱性氧化铝作为在线净化吸附剂。取1 g黄连上清丸样品，分别于萃取池底部添加不同量的碱性氧化铝，考察碱性氧化铝的量对净化效果的影响。实验结果表明：当不添加碱性氧化铝萃取时，HPLC分析小檗碱时，小檗碱色谱峰被杂质峰覆盖，干扰严重（见图5-7、图5-8）。当碱性氧化铝添加量达到5 g时，样品中小檗碱色谱峰未见干扰，采用DAD检测器进行紫外光谱图扫描，±50%和100%处三张光谱图重叠良好，光谱纯度因子PPI大于999.0，小檗碱色谱峰没有杂质干扰。比较未净化样品和净化样品色谱图，净化样品杂质峰明显减少（见图5-9，红线圈出部分）

ASE和药典方法比较分别采用ASE在线净化技术和《中国药典（2010版）》方法对同一样品进行萃取，经HPLC分析得出结果（表5-14）。采用ASE在线净化萃取技术提取的样品中小檗碱含量为0.497 mg/g，标准偏差为2.6%（n=3）；采用《中国药典（2010版）》方法提取的样品中小檗碱含量为0.474 mg/g，标准偏差为3.5%（n=3）。采用在线净化-ASE萃取法和《中国药典（2010版）》方法对小檗碱的萃取率接近，但在线净化-ASE萃取法省去了药典方法中过层析柱，浓缩等步骤，大大简化了实验过程，实现了萃取净化一步到位的目的

结果讨论采用In-cell cleanup ASE提取中药复方黄连上清丸中的小檗碱，和《中国药典（2010版）》推荐方法对小檗碱的萃取率接近，能够去除干扰小檗碱测定的杂质，能够达到萃取净化一步到位，同时具有操作简单、快速、高效等特点