Eclipse Plus C8柱改进药物HPLC分析的峰形和效率

引言由于没有一种柱子可以适用于所有分析，所以人们一直在研究新的HPLC液相色谱柱技术。科学家们一直都在寻找有助于创新、提高效率，并更快获得良好结果的更好、更快的方法。例如，在制药行业，药物的研究和开发需要更高效的色谱柱，以增加在一定时间内进行准确分析的数量。更快地筛选出潜在的药物非常有意义。另外，政府和行业规范对仪器和技术的要求也越来越严格。用于食品的来自空气和水（水，空气和食品中）的每一种物质都要严格检查其质量和安全性。高质量HPLC柱是耐用的仪器和方法的必要组成部分，有了所有这些，才能获得可靠的结果。ZORBAX Eclipse Plus C8 柱有几种填料粒径和柱尺寸，是提高效率的良好工具。它们分离酸性、中性和碱性化合物都有良好的峰形。是方法开发的色谱柱。

Eclipse Plus C8的选择性色谱柱的选择要考虑到一些因素。选择性是进行色谱柱选择最重要的因素之一。选择性系数(α)是两个峰的相对保留值：α = k2 / k1在这里 k2 和 k1 分别是第二个洗脱出来的峰和第一峰的保留因子，也称容量因子。如果这两个峰一起被洗脱，α 为 1 ；对这两个紧密相邻的峰来说，选择性接近１。选择性，或峰间距，可以通过改变温度、流动相或固定相（色谱柱）进行调节。因为选择性体现了分析物与固定相/流动相之间的相互作用，所以难以理解、也很难预测，常常需要通过实验进行优化。有各种柱子可供选择，这是改变α的有力而容易的办法，尤其是因稳定性、溶解度、pH 或其它局限无法改变流动相时。图1显示了在同样的色谱条件下，EclipsePlus C8柱、Eclipse Plus C18 柱，和 Eclipse XDBC8 柱的不同选择性。Eclipse Plus C8 柱与 EclipseXDB-C8 柱相比，虽然对三种非常难分离的化合物来说，α仅改变了6%，但分离度增加了1倍，从1.23增至2.42。

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这些柱子都有相似之处，如，同样以ZORBAX硅胶为基质，都采用的是安捷伦控制的生产技术，因此，可以预计其洗脱顺序也比较相似，如图所示。但它们之间也有明显的不同，例如，Eclipse Plus柱和Eclipse XDB柱采用的硅胶处理和键合技术不同，C18和C8的官能团也不同。这些差异反映为选择性的不同，进而将改善分离度。对于a接近1的紧密相邻峰，a的微小变化将对分离度产生极大的影响，例如在这个例子中，a 从 1.07变为1.14，分离度就从1.15增加到2.42。

快速分离(RR)小粒径的填料与大粒径填料相比，优势就是有更高的柱效。用这一特点可以明显提高效率。填充了小粒径填料的较短色谱柱，在保持了用长柱能得到的足够分离度的同时，显著加快了分析速度。图3、4、5是应用实例，用更短的高分离度快速(RR) (4.6 x 50 mm,3.5 µm)柱代替Eclipse Plus C8分析柱(4.6 x 150 mm,5 µm)。直接或“plug & play”替代都在保持足够分离

度的同时，明显缩短了分析时间，分析时间与柱长成正比。小粒径填料柱还明显提高了灵敏度。表1 列出了这三个例子中分析柱和 RR 柱分离时最后洗脱峰的峰高、峰面积和变化的百分比。由于进样量相等，用两个柱子得到的峰面积都相同，但是RR柱的峰高（灵敏度测量[信噪比]）却要高 50%。三张图中还列出了这些例子的系统反压。RR柱因较小粒径(3.5 vs. 5 µ)造成的高反压问题，通过更短的柱长(50 vs. 150 mm)得到了弥补。分析柱(150 mm)和 50-mm RR 柱的反压相等，证实了安捷伦RR柱的plug & play能力。所有的压力都在安捷伦1100和1200系列液相色谱仪的操作范围内。如果需要，还可以选择较高的流速，进行更快的分析。Eclipse Plus C8柱有1.8、3.5和5 µm三种粒径，适用于分析、高分离度快速和快速 LC 分析。表 2 列出了可供选择的各种配置。

碱性化合物的出色峰形Eclipse Plus柱（C8和C18）的显著的特点是分离各种类型样品：酸性、碱性和中性样品，都能得到出色的峰形。在上述例子的各图中都列出了用美国药典拖尾因子计算表示的峰形。每个例子中，都接近于理想状态(1.0)。高性能+峰形，柱效和分离度+均归功于全程严格控制的、改进的硅胶生产和键合技术。碱性化合物（特别是含氨基的分子）的高效反相色谱分离经常很困难。在低pH条件下(pH ＜ 3)，碱发生质子化(BH+)，因而水溶性很强，保留较差。在pH 7时，某些氨基可能仍然质子化，而其它的则失去其质子(B)。硅胶上没有反应硅醇基呈离子型(SiO-)，将与质子化的离子样品发生相互作用。这种离子交换二级反应将导致峰拖尾。在低 pH 条件下，硅醇基未离子化(SiOH)，与碱性分析物不发生相互作用。图６显示了在pH 7时，同样条件下分析２个碱性化合物的实例。这两个已知化合物，阿密曲替林和右美沙芬，由于在中性 pH 条件下部分离子化，在 B 和 BH+之间互相转化，用其它柱子分离时拖尾非常严重。但使用Eclipse Plus C8后，峰形非常好。Eclipse Plus进行了ZORBAX硅胶处理、封端和键合，降低了离子化硅醇基的相互作用，显著改善了峰形。