白毛茛中生物碱的提取和HPLC 分析

摘要本文建立了对白毛茛根粉末中生物碱进行室温萃取，并用Zorbax 快速分离 Eclipse XDB-C18 柱进行 HPLC 分析的方法，用该法准确测定了白毛茛中包括小糪碱和白毛茛碱在内的主要生物碱。也可以用这一萃取和 HPLC 分析方法测定其它生物碱，包括氢化小糪碱、白毛茛分碱和巴马亭。还可以应用于其它含小糪碱的植物根的分析。Eclipse XDB-C18 快速分离柱采用等度分离，所有组分在 15 分钟内实现了高分离度分离。

前言白毛茛(goldenseal)，学名 Hydrastis canadensis L.，是最老的草药植物之一，其作为天然药物正在受到人们的关注。白毛茛中存在的两种主要生物碱——小糪碱和白毛茛碱——被认为是其中的活性成分。氢化小糪碱、白毛茛分碱、5-羟基小糪碱和 canadaline 都是含量很小的生物碱。巴马亭与小糪碱密切相关，但在白毛茛中没有检测到，而在另一种含小糪碱的植物——黄连(Coptis)中却检测到了巴马亭[1]。白毛茛已被用作消炎药和抗生素。也用作治疗鼻充血、感冒、流感和多种肠道紊乱。该植物的整个根部都用来入药，目前市售的剂型有散装（干燥或粉末化的白毛茛根）、片剂、胶囊和酊剂。由于野生白毛茛已经被过度采集，现在大量的白毛茛由人工种植，以补充草药来源。作为草药补充物销售的白毛茛质量参差不齐，其中的活性生物碱含量差异很大。因此，迫切需要一种简单的方法进行生物碱的萃取和分析，以评价产品的质量。图 1 显示了白毛茛中生物碱的化学结构。

实验部分萃取步骤Betz 和 Anderson[1]以及 Burney[2]曾报导了室温条件下从白毛茛中萃取生物碱的方法。按照此方法进行萃取，然后采用HPLC液相色谱 对生物碱提取物进行精确定量分析。纯白毛茛根粉末的优化室温萃取条件总结如下：1. 称取约 0.5 g 白毛茛根粉末2. 加入 100 mL 乙腈:水:H3PO4 (70:30:0.1，v/v/v)，混匀3. 超声处理 5 分钟，振摇（手腕抖动）10 分钟，离心 5 分钟4. 5 倍稀释萃取物5. 稀释后的萃取物直接进行 HPLC 分析

HPLC 分析白毛茛中生物碱的 HPLC 分析，要求能够分离主要的生物碱。此外，还需要能够分离巴马亭，因为它存在于其它含有小糪碱的植物中。我们开发了一种能够分离所有这些组分的 HPLC 方法。采用 Zorbax Eclipse XDB-C18 色谱柱、醋酸铵缓冲液和乙腈混合流动相，可得到最佳的分离度和峰形。图 2 显示了分离结果，并列出了所采用的全部优化分离条件。为获得一致的保留时间，温度控制在 30°C[3]。

方法验证采用本 HPLC 方法可对室温萃取方法进行验证。本方法研究了线性、精度和生物碱的回收率。表 1 列出了这些结果。方法的精度良好，不同生物碱的回收率范围在 92%-102%，适用于定量分析。线性很好（图 3），灵敏度良好。通过标样数据计算出的小檗碱的检测限(LOD)为 0.50 mg/mL，定量限(LOQ)为1.65 mg/mL。因此可以对低水平含量的小檗碱进行精确定量，适用于检测不同来源白毛茛产品的质量。

结果白毛茛的测定采用室温萃取方法和 HPLC 分析方法测定来自 3 个不同供货商的 6 批白毛莨根粉末样品中生物碱的含量，结果列于表 2。这些结果说明来自不同供货商的样品的质量是不同的，也说明了需要一个很好的 HPLC 定量分析方法的原因。

结论白毛莨室温萃取法简便而可靠，萃取物采用 Zorbax EclipseXDB-C18 快速分离色谱柱进行等度 HPLC 分析，在 15 分钟内获得了 6 种生物碱的分离结果，分离度高，峰形好。该分析方法提供了包括小檗碱和白毛莨碱在内的白毛莨生物碱含量的可靠定量结果。该方法已通过分析来自 3 个不同供货商的白毛莨得到了验证，预期也可用于其它含小檗碱植物的分析。