《中国药典》0512高效液相色谱法修订公示稿梳理 溶液制备溶剂效应应对方案

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导读

上一篇《《中国药典》0512高效液相色谱法修订公示稿梳理  梯度延迟体积应对方案》介绍使用岛津液相色谱仪截止环功能和调整梯度起点功能可以作为一种方式应对方法开发时的系统与实际使用系统之间滞留体积的差异。本篇介绍在溶液制备中出现溶剂效应问题如何解决！

l                      溶剂效应概念及对分析的影响

在公示稿“溶液制备”章节中，提到为减少溶剂峰和色谱峰的畸变，制备供试品溶液和参比物质溶液可用流动相（或梯度起始比例流动相组成）作为溶剂，这是首次在0512通则修订公示中收载溶剂效应解决方式。

溶剂效应：样品注入色谱系统后，两端靠近流动相的目标物逐渐扩散进入流动相，中心区域目标物仍溶在原溶剂中，目标物进入色谱柱后，流动相氛围中的目标物以正常速度被洗脱，溶剂氛围中的目标物因强溶剂洗脱，移动速度快，样品在空间上开始分裂，即样品溶剂的洗脱强度强于流动相强度而导致的色谱峰展宽，分叉(严重时分裂)的现象，另外在多个项目中我们发现可能会出现峰形前延、肩峰等现象，而峰形较差会显著影响定性和定量指标。

在梯度洗脱中，溶剂效应对出峰较早的色谱峰影响更为明显。溶剂效应会影响峰形，从而影响理论塔板数、分离度等，应尽可能改善该现象！

l                      溶剂效应解决办法

1. 使用初始流动相溶解待测样品，公示稿首次收载该方法。

2. 减少进样体积，需要注意灵敏度是否满足标准要求。

3. 增加柱前管路的体积，需要改配置。

4. Co-injection（共同注入） 进样功能，软件中可直接选择该模式，操作简便。

l                      推荐仪器方案

l                      应用案例

1、《中国药典》2020年版第一增补本 石淋通片【指纹图谱】

《中国药典》2020年版第一增补本中，石淋通片增加了【指纹图谱】和【含量测定】的项目。在进行对照品夏佛塔苷进样过程中，发现了较严重的溶剂效应，可见以上对比图。使用标准进样方式，由于溶剂效应会导致峰分叉，采用 Co-injection 进样功能可有效解决此问题。

2、《中国药典》2020年版  2341第五法  药材及饮片（植物类）中禁用农药多残留测定法

禁用农药相关检测标准实施已经有三年，岛津技术团队在走访几十家企业和药检了解到，在出峰较早的化合物存在明显的溶剂效应现象，导致峰形出现分叉（严重时出现分裂）、肩峰、峰展宽及峰前延等，以上展示是国内某药品检验机构使用岛津Co-injection功能有效解决了杀虫脒和久效磷峰形问题。

3、《中国药典》2020年版  2351第六法  多种真菌毒素测定法

岛津技术团队在复现标准中发现呕吐毒素存在肩峰现象，使用Co-injection功能有效改善了峰形，并提升了响应。

4、杜仲配方颗粒国家药品标准【含量测定】

杜仲配方颗粒标准起初要求理论塔板数按松脂醇二葡萄糖苷峰计算理论塔板数应不低于10000，在后续的修订稿中修订为不低于8000。岛津技术团队在走访配方颗粒企业时，客户提到即使修订为8000的要求，对色谱柱选型要求还是很高，并且耐用性需要完善，岛津技术团队与客户共同寻找背后可能存在的原因和解决办法，最终发现两种方案可以解决（Co-injection进样功能或者优化有机相比例为22%），两种方案任选其一即可。

注：本文中所用数据均为岛津实验室特定条件下的测试数据，结果可能随实际情况变动

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