皖仪科技液相色谱测定人参中的人参皂苷

皖仪科技液相色谱测定人参中的人参皂苷

前言

人参皂苷是人参的重要活性成分，属于三萜类糖苷化合物，可分为原人参二醇组皂苷（PPD型皂苷）、原人参三醇组皂苷（PPT型皂苷）和齐墩果烷型等。目前，已从人参根中分离出40多种人参皂苷。

人参皂苷具有抗氧化、抗炎、血管舒张、抗过敏、抗糖尿病等多种治疗作用。一些人参皂苷通过减少DNA损伤、减少宿主对突变的易感性、增加免疫监测和细胞凋亡等显示其抗癌特性。此外，人参皂苷还能有效改善传统化疗药物的疗效，防止对正常组织的损伤。

1 实验方法

1.1 仪器配置

            皖仪科技LC3200系列高效液相色谱仪

        表1 高效液相色谱系统配置清单

1.2 测试条件

色谱柱：C18,5μm,4.6×250mm；

柱温：35℃；

检测波长：203nm；

流速：1.0mL/min；

流动相：A:乙腈；B:水

进样量：10μL；

                 表2 梯度条件

1.3 仪器及试剂、耗材    

试剂：甲醇：色谱纯；乙腈：色谱纯；标准物质：人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1；

辅助装置：分析天平；溶剂抽滤装置；超声波清洗机；

实验材料：滤膜：有机相滤膜，水相滤膜0.45μm

1.4 对照品制备

n  人参皂苷Rg1对照品溶液：精密称定人参皂苷Rg1对照品15.0mg，置容量瓶中，用甲醇稀释定容至10mL，制成1.5mg/mL的标准溶液。

n  人参皂苷Re对照品溶液：精密称定人参皂苷Rg1对照品9.0mg，置容量瓶中，用甲醇稀释定容至10mL，制成0.9mg/mL的标准溶液。

n  人参皂苷Rb1对照品溶液：精密称定人参皂苷Rg1对照品15.0mg，置容量瓶中，用甲醇稀释定容至10mL，制成1.5mg/mL的标准溶液。

混合对照品溶液：分别取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rb1对照品，加甲醇制成每1mL中含人参皂苷Rg10.5mg、人参皂苷Re0.3mg、人参皂苷Rb10.5mg的混合溶液。

n  人参皂苷Rg1标准系列溶液：取人参皂苷Rg1对照品溶液稀释制成1mg/L、5mg/L、10mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L、500mg/L标准系列溶液。

2 结果与讨论

2.1 标准曲线

      图1人参皂苷Rg1标准曲线及相关系数

说明：人参皂苷Rg1标准曲线线性范围较好，线性相关系数＞0.9999。2.2 标准品

          图2 人参皂苷Rg1标准品色谱图

            表3 人参皂苷Rg1色谱参数

         图3 人参皂苷Rb标准品色谱图

           表4 人参皂苷Rb色谱参数

           图4 人参皂苷Rb标准品色谱图

            表5 人参皂苷Rb色谱参数

2.3 混标

          图5 人参皂苷混合标准品色谱图

         表6 人参皂苷混合标准品色谱参数

说明：由上述混标谱图可见，样品分离较好，样品分离度在2.2以上，满足分离要求。2.3 样品重复性

          图6 人参皂苷混合标准品色谱图

表7 人参皂苷Rg1、Re、Rb1标准品重复性色谱参数

说明：重复性较好，人参皂苷Rg1保留时间RSD值为0.437%，峰面积RSD值为0.443%；人参皂苷Re保留时间RSD值为0.343%，峰面积RSD值为0.396%；人参皂苷Rb1保留时间RSD值为0.479%，峰面积RSD值为0.382%。

3 结论

本次采用皖仪科技高效液相色谱仪配置二极管阵列检测器，依据《中国药典》2020版对人参皂苷进行含量测定，由上述数据可知，标准曲线线性范围较好，线性相关系数＞0.9999；人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1理论塔板数分别为91232、46835、192000，符合药典要求理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于6000；重复性较好，人参皂苷Rg1保留时间RSD值为0.437%，峰面积RSD值为0.443%；人参皂苷Re保留时间RSD值为0.343%，峰面积RSD值为0.396%；人参皂苷Rb1保留时间RSD值为0.479%，峰面积RSD值为0.382%；人参皂苷Rg1、Re、Rb1对照品分离较好，样品分离度在2.2以上，满足分离要求。