手机版
化工仪器网手机版
化工仪器网小程序
官方微信
公众号：chem17
扫码关注视频号
【技术分享】参照USP129修订案建立单克隆抗体的SEC-UHPLC分析方法
继USP621修订版生效之后，美国药典又于2023年5月在PF49（3）中提议对通则<129治疗性重组单克隆抗体药物的分析方法(Analytical Procedures for Recombinant Therapeutic Monoclonal Antibodies) 进行修订：针对用于蛋白质SEC分析的L59型色谱柱，增加超高速、高性能的UHPLC色谱柱，即补充了单克隆抗体的SEC-UHPLC的分析方法。经过开放评议后，本次修订案作为USP-NF2024, Issue 3, 于2023年12月1日正式公布。如表1所示，对原有的L59型色谱柱尺寸（30 cm）增加了UHPLC专用的30 cm色谱柱。
表1. L59型色谱柱同时收录了TSKgel G3000SWXL和TSKgel UP-SW3000
一、从SEC-HPLC转换为SEC-UHPLC时的条件变更
USP中规定了使用L59型色谱柱分析抗体的多聚体、单体和片段。其中，比较有代表性的是将TSKgel G3000SWXL（5μm, HPLC）转换为TSKgel UP-SW3000-LS（2μm,UHPLC) 。除此以外，还可以将用于分离抗体片段的TSKgel G2000SWXL色谱柱转换为TSKgel UP-SW2000。将用于分离多聚体的TSKgel G4000SWXL（8μm）转换为TSKgel UP-SW Aggregate（3μm），分析条件的变更请参照表2。
表2.从HPLC色谱柱转换为UHPLC色谱柱时分离条件的变更
二、单克隆抗体的SEC-UHPLC分析实例
图1是在分析单克隆抗体时，从30cm的G3000SWXL色谱柱转换为15 cm的UP-SW3000-LS色谱柱，在保持同等分离度的前提下，分析时间缩短为50%，流动相减少约80%。
图1. SEC-HPLC (30 cm色谱柱) 转换为SEC-UHPLC (15 cm色谱柱) 的分离例
有时为了提高分离度会串联2支30cm的SEC-HPLC色谱柱进行分析，这种情况下，可转换为使用30cm的SEC-UHPLC色谱柱进行分析，也能期待同样的缩减效果（图2）。
图2.SEC-HPLC（30cm色谱柱×2支) 转换为SEC-UHPLC (30 cm色谱柱) 的分离例
如果您有色谱柱使用或维护保养方面的任何问题，欢迎联系东曹技术中心。
免责声明
- 凡本网注明“来源：化工仪器网”的所有作品，均为浙江兴旺宝明通网络有限公司-化工仪器网合法拥有版权或有权使用的作品，未经本网授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经本网授权使用作品的，应在授权范围内使用，并注明“来源：化工仪器网”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
- 本网转载并注明自其他来源（非化工仪器网）的作品，目的在于传递更多信息，并不代表本网赞同其观点和对其真实性负责，不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时，必须保留本网注明的作品第一来源，并自负版权等法律责任。
- 如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起一周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。
最新产品
采购中心
