操作凝胶渗透色谱要注意哪些操作细节

2024年04月19日 10:54 来源：上海杜凯生物科技有限公司

　　凝胶渗透色谱，也称为尺寸排阻色谱，是一种用于分离和分析高分子化合物(如聚合物)的分子量分布的液相色谱技术。在使用凝胶渗透色谱时，需要注意以下事项以确保实验的准确性和重现性：

　　1. 样品准备：

　　- 确保样品充分溶解在流动相中，不溶或部分溶解的样品会影响色谱峰的形状和位置。

　　- 使用适当的溶剂对样品进行过滤或离心，以去除可能存在的大颗粒或聚集体，这些杂质可能会堵塞色谱柱。

　　- 根据需要对样品进行稀释，以避免过载和柱污染。

　　2. 色谱柱的选择和维护：

　　- 根据样品的分子量范围选择合适的色谱柱，不同的柱具有不同的分离范围。

　　- 定期清洗和再生色谱柱，以去除吸附的杂质和恢复柱效。

　　- 避免柱干涸，因为这会损坏固定相并影响分离效果。

　　3. 流动相的选择：

　　- 选择与样品兼容且不会对检测器产生干扰的流动相。

　　- 确保流动相纯净无杂质，以防止额外的色谱峰出现。

　　- 使用前对流动相进行脱气处理，以减少气泡对流速和检测的影响。

　　4. 系统温度的控制：

　　- 保持恒定的柱温，因为温度波动会影响样品的扩散系数和相互作用，从而影响分离效果。

　　- 对于某些聚合物，可能需要控制较高的温度以确保其充分溶解。

　　5. 检测器的校准：

　　- 定期校准检测器，以确保测量结果的准确性。

　　- 如果使用折射率检测器，需要确保流动相与样品有足够的折光指数差异。

　　6. 标准品的使用：

　　- 使用已知分子量的标准品进行系统校准，以建立可靠的校正曲线。

　　- 标准品应与被测样品具有相似的化学结构和溶解行为。

　　7. 数据解析：

　　- 使用专业的软件进行数据分析，正确解读色谱图和分子量分布。

　　- 注意基线的稳定性，基线的漂移可能会导致分子量分布的误判。

　　8. 操作技巧：

　　- 在启动色谱系统之前，确保所有连接都紧固无漏，以防止流动相泄漏。

　　- 避免快速改变流速或压力，这可能会导致柱内填料的不稳定。

　　9. 安全措施：

　　- 使用有机溶剂作为流动相时，应注意通风和防火安全。

　　- 遵守实验室的安全规程，佩戴适当的个人防护装备。

　　10. 实验记录：

　　- 详细记录实验条件、样品信息、操作步骤等，以便于实验结果的复现和问题的追踪。

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