离子色谱法检测食用菌中的八种糖含量

经常吃的银耳木耳就有！测测其中的糖含量

关键词：离子色谱；食用菌；岩藻糖；阿糖醇；海藻糖；甘露糖；甘露醇；葡萄糖；半乳糖；核糖；方法学。

前言

食用菌属于真菌类生物,并含有生物活性物质,可以在一定程度上提高人体的免疫力,食用菌也有抗癌的作用,其中所含的多糖体可以刺激抗体的形成,从而增强内部防御能力,并降低某些物质诱发肿瘤的几率。

目前市面上出现的食用菌保健品，无法确定其提取液是食用菌提取出来的，还是由其他添加剂中提取出来的。所以将样品中单糖提取出来并水解，根据糖的分布不同以此来鉴定不同食用菌。

皖仪开发了一种离子色谱测试方法检测食用菌中的八种糖含量，样品前处理操作简单，测试准确性高，重现性好，不同组分间分离度良好，可以满足客户大规模测试的要求，并且提高时效性，测试结果一致性，减少人为及系统误差。

1.  实验方法

1.1  测试条件

离子色谱仪IC6300系列

仪器：IC6300系列离子色谱仪配置安培检测器；

色谱柱：糖类专用色谱柱（4.0mm×250mm）；

保护柱：糖类专用保护柱（30 mm×4 mm）；

柱温：45℃；

流速：0.4ml/min；

进样量：25μL；

检测器：安培检测器。

1.2 使用试剂

淋洗液：A：超纯水   B：600mM NaOH 

标样：

岩藻糖：纯度≥99％或经国家认证授予标准物质证书的标准物质；

阿糖醇：纯度≥99％或经国家认证授予标准物质证书的标准物质；

海藻糖：纯度≥99％或经国家认证授予标准物质证书的标准物质；

甘露糖：纯度≥99％或经国家认证授予标准物质证书的标准物质；

葡萄糖：纯度≥99％或经国家认证授予标准物质证书的标准物质

半乳糖：纯度≥99％或经国家认证授予标准物质证书的标准物质

核糖：纯度≥99％或经国家认证授予标准物质证书的标准物质

甘露醇：纯度≥99％或经国家认证授予标准物质证书的标准物质

样品：食用菌

1.3 标准溶液制备

单一标准储备液：分别称取0.1g（精确至0.1mg）岩藻糖、阿糖醇、海藻糖、甘露糖、甘露醇、葡萄糖、半乳糖、核糖标准品，用0.1％苯甲酸溶液溶解，转移至100mL容量瓶定容至刻度，配置成浓度为1000mg/L的单一标准储备液，贮存在4℃条件下，有效期一个月。

混合标准中间液(100mg/L):分别移取20.00mL岩藻糖、阿糖醇、海藻糖、甘露糖、甘露醇、葡萄糖、半乳糖、核糖单一标准储备液于200mL容量瓶中,用0.1％苯甲酸溶液定容至刻度。置于0℃~4℃密封，保存期1个月。

混合标准工作液:分别吸取0.250mL、0.500mL、1.00mL、2.00mL、5.00mL、10.00mL、20.00mL和50.00mL混合标准中间液(100mg/L)于100mL容量瓶中,用0.1％苯甲酸溶液定容至刻度,配得岩藻糖、阿糖醇、海藻糖、甘露糖、甘露醇、葡萄糖、半乳糖、核糖质量浓度为0.25mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L、2.00mg/L、5.00mL、10.00mL、20.00mg/L和50.00mg/L的混合标准工作液。临用现配。

1.3 标准曲线的制备

混合标准工作液：分别吸取0.250mL、0.500mL、1.00mL、2.00mL、5.00mL、10.00mL、20.00mL和50.00mL混合标准中间液(100mg/L)于100mL容量瓶中,用水定容至刻度,配得岩藻糖、阿糖醇、海藻糖、甘露糖、甘露醇、葡萄糖、半乳糖、核糖的质量浓度为0.25mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L、2.00mg/L、5.00mL、10.00mL、20.00mg/L和50.00mg/L的混合标准工作液。临用现配。

表1 标准系列曲线浓度梯度表

2．测试结果

2.1 岩藻糖、阿糖醇、海藻糖、甘露糖、甘露醇、葡萄糖、半乳糖、核糖线性测试结果

依次移取0.25mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L、2.00mg/L、5.00mL、10.00mL、20.00mg/L和50.00mg/L的系列标准工作曲线，按照1.1工作测试条件得到标准曲线线谱图多点重叠图如图1，果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖在该色谱条件下线性相关系数R=0.999以上，线性良好。

图1 食用菌中八种糖标准曲线重叠色谱图

表2线性方程

2.2 岩藻糖、阿糖醇、海藻糖、甘露糖、甘露醇、葡萄糖、半乳糖、核糖标准品谱图

在1.1的工作测试条件下条件下，标准品进行检测。样品图谱如图2，所示样品图谱中的目标离子岩藻糖、阿糖醇、甘露糖、甘露醇、葡萄糖、半乳糖峰形对称，分离度良好，最终得到样品中岩藻糖、阿糖醇、海藻糖、甘露糖、甘露醇、葡萄糖、半乳糖、核糖的含量。绣球菌中阿糖醇含量为0.48mg/g，甘露醇含量为3.525mg/g，岩藻糖含量为13.125mg/g，甘露糖含量为33.015mg/g，葡萄糖含量为273.75mg/g，半乳糖含量为29.415mg/g。

图2 样品测试谱图

2.3 样品加标回收重复性测试结果

分别向样品加5mg/L、10mg/L、25mg/L的标准品，每个浓度3个平行样品进行测定，其测定谱图分别如图3-5所示，其回收率在95.25％~105.94％。

图三 样品中加标5mg/L测试谱图

图四 样品加标10mg/L测试重叠图谱

图五 样品加标25mg/L测试重叠图谱

2.4 检出限测试

对0.25mg/L糖类标准品进行检出限测定，其信噪比在95~505之间，大于3,图六为样品进一步稀释后加标测试图谱。

图六 0.25mg/L标准品测试图谱

表三 检出限与定量限测定表

3. 结论

本次采用皖仪科技离子色谱仪IC6300系列对食用菌中的八种糖进行测试，包含系统适用性、标准曲线验证、重复性验证、加标回收率。测试结果峰形较好，线性良好，重复性满足要求，灵敏度高完全满足测试要求。