【ISCO】乙腈与甲醇在反相层析中的替换效果

一、摘要

由于成本或溶剂的可获取性，有时有必要在反相MPLC中采用与原方法不同的溶剂。许多方法使用乙腈，但在纯化规模放大时，可能更倾向于使用其他溶剂。为了提高纯化效果，可能需要进行溶剂替换。

本应用说明描述了一种方法，可以简便地估算替代溶剂的浓度，以获得与原方法所用溶剂相似的结果。

二、讨论

在反相色谱法中能够更换溶剂，这使得从分析规模转换到制备规模成为可能，或者通过替换溶剂来节省成本。当所需溶剂不可获得时，溶剂替换也是有用的。

图1中的列线图列出了反相中常用的各种有机溶剂的等效浓度。通过使用垂直线连接当前溶剂浓度与新溶剂的浓度来读取新溶剂的浓度。40%乙腈（MeCN）的溶剂可以替换为50%甲醇（MeOH）或30%四氢呋喃（THF），以获得相同的纯化效果。实际上，根据化合物的不同，这可能会有所±5%的变化，但使用列线图将提供一个接近的起点。

图1：溶剂间转换时，确定有机溶剂组成的列线图

等度洗脱

所有实验都是使用吸附在硅藻土上的尼泊金甲酯和尼泊金丙酯，并通过固体负载柱进行的。这些实验与采用40%乙腈的分离效果进行了比较。等度洗脱对溶剂浓度非常敏感。图2显示40%乙腈的纯化结果与根据图一找到的对应溶剂浓度纯化的解果。将甲醇和四氢呋喃的浓度调整5%（图3）可使纯化效果更接近原始的乙腈运行结果。

图2：使用基于列线图的等度洗脱方法纯化尼泊金甲酯和尼泊金丙酯的结果

图3：使用调整后的等度洗脱方法纯化尼泊金甲酯和尼泊金丙酯的结果

由于溶剂与不同化合物类别之间的选择性差异，很难使在不同溶剂中运行的色谱图完荃匹配。改变冲提溶剂可以利用来调整洗脱化合物之间的间距。在这范例中，四氢呋喃（THF）与甲醇和乙腈相比显示出显著差异。

梯度洗脱

大多数MPLC纯化都是使用梯度洗脱进行的。为了推定不同溶剂所适用的梯度，只需依上述方式于列线图找出对应冲提浓度后，以等梯度方法运行即可。对于图4中的例子，梯度从5%乙腈跑到95%乙腈。使用列线图得到了5%至95%甲醇和5%至69%四氢呋喃的梯度。

三种溶剂都表现出了纯化效果，但选择性略有不同。选择性差异是因为溶剂之间的转换是非线性的。依照本文阐述方法来调整反向冲提的有机溶剂便可快速找到更好的通提条件。

图4：使用乙腈、甲醇和四氢呋喃对尼泊金甲酯和尼泊金丙酯进行梯度纯化的色谱图

三、结论

C18方法可根据溶剂的可获取性或成本轻松转换为替代溶剂。此外，溶剂替换列线图提供了一种选择方法，协助挑选不同的溶剂选择性。