高效液相色谱仪的柱子选择与使用方法

2025年04月20日 11:21 来源：天津市兰博实验仪器设备有限公司

　　一、色谱柱的选择要点

　　高效液相色谱仪是分离系统的核心部件，其选择直接影响分析结果的准确性和重现性。选择色谱柱时需考虑以下几个关键因素：

　　固定相类型：根据分析物性质选择C18、C8、苯基柱或氨基柱等。C18柱适用于大多数非极性至中等极性化合物，而极性化合物可能需要氨基柱或氰基柱。

　　pH耐受范围：硅胶基质柱的耐受超出此范围需选择杂化或聚合物基质柱。

　　二、色谱柱的正确使用方法

　　1、柱前处理：

　　新柱使用前应按说明书进行活化，通常用高比例有机相冲洗去除保存溶剂。梯度洗脱方法应从低有机相开始逐步提高。

　　2、流动相匹配：

　　确保流动相与柱保存溶剂互溶，避免直接从不互溶溶剂转换。水相缓冲液应现配现用，防止微生物生长或盐析出。

　　3、样品前处理：

　　样品应溶解在初始流动相或弱溶剂中，避免使用强溶剂造成峰形畸变。复杂样品需经过滤或固相萃取处理。

　　4、柱保护措施：

　　在柱前安装保护柱可延长分析柱寿命。对于生物样品或复杂基质，建议使用在线过滤器。

　　三、维护与保存

　　1、日常冲洗：

　　每天使用后应用高比例有机相冲洗30分钟以上，去除柱内残留物。缓冲液使用后需先用水冲洗再转有机相。

　　2、长期保存：

　　不使用时，柱应保存在高比例有机相中，两端密封防止干燥。硅胶柱避免保存在纯水中。

　　3、性能监测：

　　定期用标准品测试柱效、不对称因子和保留时间，建立柱性能档案。当柱效下降或峰形明显变差时应考虑更换。

　　4、故障处理：

　　压力异常升高可能因筛板堵塞，可尝试反向冲洗或更换筛板。峰形拖尾可能因柱头塌陷或污染，必要时进行柱头修复或更换。

　　正确选择和使用色谱柱不仅能获得理想分离效果，还能延长柱寿命，降低分析成本。实验人员应根据具体应用需求，建立适合自己实验室的标准操作规程。

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