液质联用仪分析鸡肉中的农药残留

摘要：本应用简报描述了使用快速、简便、经济、高效、耐用和安全 (QuEChERS) 的 AOAC 样品制备方法来萃取和净化鸡肉中多种农药类型典型代表的 12 种农药残留。早期的 AOAC方法采用了在水/乙腈缓冲系统中进行的初萃取、加入盐分后的萃取/分离步骤，以及使用分散固相萃取 (dispersive SPE) 的净化步骤。然后通过液相色谱与在阳离子多反应监测(MRM) 模式下操作的电喷雾离子化串联质谱仪 (LC/ESI/MS/MS) 进行联用，来确定鸡肉提取物中是否存在目标农药。回收率实验的加标水平为 10 和 50 ng/g。平均回收率在76% 至 107% 范围内，相对标准偏差 RSD 低于 10%。

前言AOAC QuEChERS 方法广泛应用于食品中的农药分析 [1,2]。本方法采用乙腈提取，然后利用无水硫酸镁 (MgSO4) 将样品中的水进行盐析分离，以醋酸盐缓冲液诱导分离。而净化方面，本应用选择了其他食品方法中所用的 Agilent 分散 SPE 试剂盒。这类试剂盒的样品容量为 8 mL，含 900 mg MgSO4，在每毫升乙腈提取物中加入 150 mg C18。在本研究中，分析 12 种农药以便于对适用于其他食品方法的 Agilent Bond Elut AOAC 缓冲提取试剂盒和Bond Elut QuEChERS 分散 SPE 试剂盒的性能进行评估。该方法已通过分析物回收率和重现性验证。表 1 所示为鸡肉中农药的化学和法规信息。

实验部分所有试剂和溶剂均为 HPLC液相色谱仪 或分析纯级。甲醇 (MeOH) 和乙腈(ACN) 购自 Honeywell（美国密歇根州马斯基根）。甲酸 (FA) 购自 Fluka（德国施泰因海姆）。农药标准品购自西格玛奥德里奇公司（美国密苏里州圣路易斯）。内标物（磷酸三苯酯，TPP）来自安捷伦科技公司（美国特拉华州威尔明顿）。标准品和内标 (IS) 储备液（除多菌灵为 0.5 mg/mL 之外，其它均为2.0 mg/mL）分别用含甲醇和 0.1% FA 的乙腈或二甲基亚砜制备，并在 –20 °C 下保存。两份浓度为 0.5 和 2.5 µg/mL 的 QC 加标溶液用含 0.1% FA 的 1:1 乙腈:水每日现场制备。将等量的 2.5 µg/mLTPP 加入到含 0.1% FA 的 1:1 乙腈:水中作为 IS 加标溶液。

仪器和材料• Agilent 1200 Infinity 系列• 电喷雾离子化 Agilent 6460 三重四极杆 LC/MS 系统• Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 缓冲提取试剂盒（部件号 5982-5755CH）• 适用于其他食品方法的 Agilent Bond Elut QuEChERS 分散SPE 试剂盒（部件号 5982-4956CH）• Eppendorf 微量离心管（Brinkmann 仪器，美国纽约州韦斯特伯里）• 飞鸽离心机（安亭科学仪器，中国上海）

HPLC 条件色谱柱： Agilent Poroshell 120 EC-C18，2.1 × 100 mm，2.7 µm（部件号 695775-902）流动相： A：0.1% 甲酸 (FA) 的水溶液B：0.1% FA 的乙腈溶液进样量： 5 µL流速： 0.4 mL/min梯度： 时间 (min) %B0 51 53 507 908 908.2 59 5温度： 30 °C后运行： 2 min总运行时间： 11 minMS 条件气体温度： 350 °C气体流速： 10 L/min雾化器压力： 40 psi毛细管电压： 3500 V农药在正离子模式下进行监测。分析物的其他条件见表 2。

样品前处理鸡肉购自当地市场。将肉切成小块，置于洁净的塑料袋中，并在–20 °C 下冷冻过夜。第二天只取需用量的冷冻鸡肉，并充分混匀。将样品*粉碎，制得均质样品。确保所得的最终样品中无明显可见的鸡肉块。萃取/分离取 5 g (± 0.1 g) 均质样品放入 50 mL 离心管中。采用 100 µL QC加标溶液制备 QC 样品。在对照空白样品外的其余所有样品中均加入内标加标溶液 (100 µL)，制备内标浓度为 50 ng/g 的样品溶液。盖上离心管，涡旋振荡 1 min。利用分液器向每个离心管中加入等量的水 10 mL。盖上离心管，涡旋振荡 1 min。利用分液器向每个离心管中加入等量的 15 mL 乙腈（含 0.1% 乙酸）。盖上离心管，手动振摇 1 min。向每个离心管中直接加入 Bond ElutQuEChERS AOAC 萃取盐包（含无水硫酸镁 6 g 和醋酸钠 1.5 g）。盖紧离心管，手动剧烈振摇 20 s，确保溶剂与所有样品充分混合，结晶聚集物*打碎。最后将样品离心管以 4000 rpm 的转速离心 5 min。

分散固相萃取的净化从离心管中吸取 8mL乙腈上清液，移至 15mLBond ElutQuEChERSAOAC 分散 SPE 管。分散 SPE 管中含有 900 mg 无水硫酸镁和150 mg C18。将离心管盖紧，涡旋振荡 1 min。然后用标准离心机以 4000 rpm 的转速离心 5 min。取萃取液 2 mL 转移至试管中，并在低于 40 °C 的温度下于氮气环境中干燥。最终残留物用乙腈:水(1:9) 溶解并定容至 1 mL。然后将残留物通过 0.2 µm 安捷伦优级针头过滤器进行过滤（部件号 5190-5106）并用 LC/MS/MS 分析。

 结果与讨论本研究根据建议将同样适用于其他食品方法的 AOAC 分散 SPE 试剂盒应用于鸡肉分析。由于 LC/MS/MS 具有强大的选择性，空白基质的 MRM 色谱图中未显示目标分析物的干扰峰。图 1 和图 2 中所示为空白基质（内标加标）和分散 SPE 方法处理后的10 ng/g 鸡肉提取物的 LC/MS/MS 色谱图。回收率和重现性在粉碎的样品中加入农药标准品来评估回收率和重现性，农药标准品浓度水平为 10 和 50 ng/g。各浓度水平重复分析 6 次。回收率和重现性（以 RSD 表示）数据见表 4。由数据可知，所得的12 种农药的回收率和精密度良好。

结论适用于其他食品方法的 Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 缓冲提取试剂盒和分散 SPE 试剂盒为鸡肉中代表性农药的纯化提供了简单、快速和高效的方法。根据加标基质的标准样品来看，鸡肉中多种类、多残留农药测定的回收率和重现性是可以接受的。同时，鸡肉中的杂质和基质效应对目标化合物的定量无干扰。由于研究中所选择的农药代表了各种不同类别和性质的农药，因此，Bond Elut QuEChERS AOAC 萃取和分散 SPE 试剂盒是用于类似食品基质中其他农药分析的选择。