对三七总皂苷进行快速液相色谱分析

前言：三七（Panax notoginseng，也称 San Qi）是一种五加科植物 。它能够影响血液循环 ，是一种治疗出血性疾病的传统中草药 [1]，也可以用作补品 。三七中的皂苷大约占其总重量的 8–12%。其主要生物活性成分三七总皂苷常用来治疗冠心病 、心绞痛 、中风和动脉硬化[2，3]。三七总皂苷包含一些活性组分 ，如三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1、Rb1、Re 和 Rd。皂苷的分析对于评价三七及其中药制剂的质量非常重要 。当采用常规液相色谱柱 ，按照《中国药典 》方法分析三七总皂苷时[4]，HPLC 运行时间通常超过 60 分钟 。安捷伦 Poroshell 120 EC-C18（2.7 µm）色谱柱填充了表面多孔填料 ，具有与亚 2 µm 全多孔填料色谱柱相似的性能 ，可以实现快速分离 ，并且柱压低 。本应用报告介绍了一种采用 Poroshell 120 EC-C18 色谱柱 ，在 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统上分析三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1、Re、Rb1 和 Rd 的快速质量控制方法 。与常规方法相比 ，该方法快速 、高效 、分离度高 ，溶剂消耗也大大减少 。

实验部分分析采用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统 ，包括一套二元泵（G4220A）、一个柱温箱（TCC，G1316C）、一台自动进样器（G4226A）和一台二极管阵列检测器（DAD，G4212A）。色谱柱Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18，4.6 × 250 mm，5 µm（部件号 959990-902）Agilent Poroshell 120 EC-C18，4.6 × 75 mm，2.7 µm（部件号697975-902）

化合物目标化合物及其结构见图 1。用 70% 的甲醇水溶液配制浓度为2.5 mg/mL 的样品溶液 。三七总皂苷购于当地一家中药店 。称取25 mg 样品粉末置于 10 mL 容量瓶中 ，加 70% 的甲醇水溶液将其溶解并定容至刻度 。用 0.45 µm 再生纤维素膜过滤器（部件号5064-8221）对上述溶液进行过滤 ，然后取滤液直接进样到 HPLC系统 。

‍

结果与讨论采用安捷伦 ZORBAX Eclipse Plus C18（4.6 × 250 mm，5 µm）色谱柱 ，按照 2010 年版《中国药典 》中的方法测定三七总皂苷 。分离三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1、Re、Rb1 和 Rd 用时约60 分钟 。目标化合物实现基线分离且峰形 良 好 。安捷伦Poroshell 2.7 µm 颗粒色谱柱具有与亚 2 µm 全多孔颗粒色谱柱相似的柱效 ，但柱压更低 。采用安捷伦 Poroshell 120 EC-C18（4.6 × 75 mm，2.7 µm）色谱柱 ，可以快速实现方法的转移和优化 。如图 2 所示 ，分析时间从 60 分钟降至 18 分钟 ，同时难分离组分对 Rg1 和 Re 的分离度得到改善 ，并且 Rg1 的理论塔板数更高 ，超过了 2010 年版《中国药典 》的要求（N>6000）。采用安捷伦 Poroshell 120 EC-C18（4.6 × 75 mm，2.7 µm）色谱柱时 ，柱压低于 270 bar，非常适合在 400 bar 的 HPLC 上运行 。另外 ，溶剂的消耗也大大减少 ，降低了分析费用 。

结论采用安捷伦 ZORBAX Eclipse Plus C18（4.6 × 250 mm，5 µm）色谱柱 ，按照传统方法分析了三七总皂苷 。采用更短的安捷伦Poroshell 120 EC-C18 色谱柱可以大大缩短分析时间 ，并获得更好的分离和峰形 ，从而节省大量时间和分析费用 。安捷伦Poroshell 120 色谱柱的柱效超过了 2010 年版《中国药典 》中分析三七总皂苷的相关要求 。本方法适用于评价三七及其中药制剂的质量 。