使用带 UV 和 MS 检测的高分离度快速液相色谱仪建立中药制剂的可靠质控方法

摘要 本应用报告报导了采用带紫外-可见和四极杆质谱检测器的高分离度快速液相色谱仪， 建立分析各种中药(TCM)及中药制剂的可靠质控方法。比较了不同中药的 UV 和 MS 检测的色谱图，并通过结合 UV 与 MS 图谱鉴定目标化合物。

前言 中国有着长期使用中药和中药制剂的历 史，对其疗效有着丰富的经验。然而， 一直以来质量控制却只是基于中草药的 外观。随着新技术的发展，人们发现中 药中含有成百上千种化合物，其浓度范 围差异很大。而且，不同生长地域、不 同采收时节，以及不同炮制和加工工艺， 都会影响中草药的组分。因此，控制中 药中化合物的质量挑战。由于特定 组分的中药制剂常常包含多种中药，所 以，现在只检测中药制剂中 1 种或 2 种 成分的方法已不足以控制其质量。例如， 芪参益气滴丸，一种用于治疗冠心病的中药，就包含以下四种中药成分： • 黄芪(Astragali) • 丹参(Salviae miltiorrhizae) • 三七(Notoginseng) • 降香(Lignum dalbergine ordoriferae) 本研究以芪参益气滴丸为样品，用带紫 外-可见和质谱检测的高分离度快速液相 色谱（RRLC），建立了一种对中药进行 质量控制的新方法。本研究主要目的是 建立一种可靠的方法，检测在加热或混 合过程中不发生改变的潜在目标化合物

实验部分 仪器 • Agilent 1200 系列高分离度快速液相 色谱系统，包含带真空脱气机的 SL 型 二元泵、SL 型柱温箱和配置微量流通 池（2 µL 体积，3 mm 光程）的 SL 型二 极管阵列检测器 • 配置 ESI 源的 Agilent 6140 四极杆质 谱系统 • 安捷伦化学工作站 B.02.01 SR1，用于 数据采集和处理 • Agilent ZORBAX SB-C18 RRHT 色谱 柱，3.0 x 50 mm，1.8 µm 粒径 标准品 丹酚酸 B、丹参酮 I、丹参酮 IIA、隐丹参 酮、丹参素、三七皂甙 R1 和黄芪甲苷均 购自中国药品生物制品检定所（NICPBP）。 人参皂甙 Rg1、人参皂甙 Rb1、3,4-二羟基苯甲酸、人参皂甙 Re 和 人 参 皂 甙 Rc 购 自 美 国 SigmaAldrich 公司

溶剂 乙腈购自美国 Fisher 公司，水经 Milli-Q 纯水系统制备。 样品和样品制备 芪参益气滴丸、黄芪、丹参、三七中间体 提取物和降香挥发油由中国 TASLY 制药 公司友情赠送。中药材购自当地中药店。 将滴丸、中药提取物和中药材溶解在 70%甲醇/水溶液中，超声处理 30 分钟， 用 0.22 µm 滤膜过滤。 RRLC 方法 • 流动相： A：0.1% 甲酸的水溶液 B：0.1% 甲酸的乙腈溶液 • 梯度：0 分钟，10% B；8 分钟，38% B；12 分钟，100% B；保持 3 分钟， 然后至 10% B • 流速：1.0 mL/min (被动分流器将进入 MS 的流速降低至 0.4 mL/min) • 柱温：45 °C • 检测波长：203 nm • 峰宽：0.5 s • 狭缝宽度：4 nm • 光谱：190-400 nm，步进 2 nm MS 方法 • 扫描：80-1400 (正/负) • 碎裂电压：70 (正/负) • 干燥气：12 L/min • 雾化器压力：50 psi • 干燥气温度：50 °C • 毛细管电压：3200 V (正/负)

结果与讨论 用安捷伦方法转换工具（可提供光盘，出 版号 5989-5130EN）将传统液相色谱方 法转为高分离度快速方法。 丹参、三七、黄芪和降香提取物的比较 图 1 显示，在 203 nm 下得到的丹参和三 七的色谱图与混合提取物不同。混合 和加热后，某些色谱峰消失，并出现了一 些新色谱峰。 这说明，在质控过程中对目标化合物进行 筛查是重要的一步，以确定该化合物在生 产过程中没有改变。大多数研究人员采用 203 nm 进行检测，因为主要活性成分是 在 203 nm 有弱吸收的皂甙。但在 203 nm 下出现的几个大峰可能都与质量控制无 关，而小峰则可能对活性成分的研究更为 重要。因此，需要用灵敏度更高的检测器 进行补充检测，以提供组分的更多信息。不同检测器和条件的比较 图 2 显示了 UV 和 MS 检测结果的差异。 质谱总离子流色谱图(TIC)中出现的峰更 多，因为某些组分没有 UV 吸收或吸收 很弱。采用 MS 检测增加了另一方面的 信息，并且提供了不同化合物的更多结 构信息。负极性模式给出了更完整的色 谱峰信息，可以对目标化合物进行质控 鉴定。 芪参益气滴丸和不同提取物的比较 图 3 显示了从三种提取物和其它添加剂 中制备的丹参、三七、黄芪和降香提取物， 以及芪参益气滴丸的色谱图。标号的色谱 峰为该中药制剂质量控制扫描的目标化合 物。根据 UV 和 MS 数据，研究了不同色 谱峰，以确定这些化合物是否发生了改变。 表 1 列出了鉴定结果。

结论 本应用报告报导了采用 UV 和 MS 检测的 RRLC 方法，比目前药典的质量控制方法 更加可靠，因为该方法可以根据 UV 和 MS 检测器提供的信息追踪中药中几种成 分的质量。由于在生产和制备过程中这些 组分可能发生改变，所以追踪这些组分非 常重要。用于质谱检测的 Agilent 6140 四 极杆质谱使用简便，并能与 Agilent 1200 系列 RRLC 系统和安捷伦化学工作站软件集成。