【技术分享】SEC分析中样品吸附的改善——流动相及色谱柱应对策略

使用尺寸排阻色谱法（SEC）分离生物大分子时，有时会发生因样品吸附在色谱柱上，而导致色谱图变化或出现异常洗脱峰的现象。该现象往往是样品的疏水性和静电作用引起的，有时在分离时反映为色谱柱间差异。为解决这类问题，可以通过向流动相中添加各种试剂来抑制吸附，以实现正常的SEC分离。

我们汇总了可以抑制样品与色谱柱之间相互作用的试剂种类，并归纳了不同SEC流动相改善色谱分离效果的示例。希望能给大家的分析工作提供参考。

一、可添加试剂的种类及效果

二、不同SEC流动相的改善示例

下表是按照样品分类归纳了SEC流动相对样品吸附、相互作用的改善示例。虽然在出现静电相互作用时，向流动相中添加盐便可抑制，在发生疏水相互作用时，选择哪种添加试剂是非常重要的。

另外，由于添加试剂可能会导致生物大分子的结构发生显著变化、失活或变性，因此需要特别注意。

三、色谱柱的老化处理

在SEC色谱柱的使用初期，常会出现蛋白质多聚体等物质吸附于色谱柱的现象。防止该现象的对策是可以对色谱柱进行老化处理（预处理）。

请在色谱柱的老化处理后分析目标样品，确认多聚体等物质的洗脱峰面积已经稳定。不过，色谱柱的老化处理是最后的办法，建议大家尽量去找到合适的流动相以抑制吸附。如果您有色谱柱使用或维护保养方面的任何问题，欢迎联系东曹技术中心。