液相色谱仪测量品牌药和仿制药中的痕量杂质

摘要本研究展示了一种比较品牌和仿制非处方 (OTC) 对乙酰氨基酚药物中相关杂质的方法。该工作流程包括 Agilent InfinityLab 液相色谱/质谱选择性检测器 (LC/MSD iQ) 和Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统。本研究鉴定的杂质浓度低于使用 UV 能够可靠检出的浓度。

前言多数 OTC 药物都是根据品牌产品开发的仿制药，无需处方即可购买。这些仿制药由不同的制造商出售，有助于刺激竞争并降低价格，使患者更容易负担。仿制OTC 药品生产企业必须满足与 USFDA 针对已批准品牌药确定的规格、纯度、稳定性和相关杂质限度等相同的质量属性[1]。仿制药品制造商必须能够表征其产品及其杂质，通常使用 HPLC 和 UV 检测。添加质量选择检测器可以大大缩短典型 USP或 EP 方法的分析时间[2]，因为共洗脱组分可以由目标化合物的质量明确地确定。本研究对比了对乙酰氨基酚品牌药和仿制OTC 药中的相关杂质。使用 InfinityLabLC/MSD iQ 和 1290 Infinity II 液相色谱系统筛查杂质。基于单四极杆技术的LC/MSD iQ 是一款强大耐用的检测系统，其设计重点是简单易用性和可靠性。这是一款直观的仪器，只需极少的用户培训。它可以采用高液相色谱流速，并能自动优化 MS 参数，以提供最佳结果。使用质谱检测能够确保对活性药物成分(API) 及其相关杂质，以及更为重要的任何未知或意外杂质进行明确检测。色谱工作人员可以轻松地将 LC/MSD iQ 作为新模块加入现有液相色谱堆栈中。此款仪器经过专门设计，可以轻松集成到Agilent 1260 Infinity II 液相色谱系统、1290 Infinity II 液相色谱系统甚至更旧型号的液相色谱系统中，其空间设计可插入与液相色谱模块相同的电源插座中。包括 MS 和真空泵在内的 HPLC 堆栈可置于Agilent InfinityLab Flex Bench MS 移动支架上，从而节省了工作台空间，并可快速安全地移动整个系统。

实验部分标准品与化学品所有试剂和溶剂均为 HPLC 或 LC/MS级。甲醇购自 Honeywell (Morristown,NJ, USA)。对乙酰氨基酚 API 其相关杂质和乙酸的标准品购自 Millipore-Sigma(Merck, Darmstadt, Germany)。超纯水产自采用 LC-Pak Polisher 和 0.22 µm 膜式终端过滤器滤芯的 Milli-Q Integral 系统(EMD Millipore, Billerica, MA, USA)。OTC 药品样品购自当地药店，品牌产品为药品 1，仿制产品为药品 2。

仪器LC/MSD iQ 系统包括以下模块：• Agilent 1290 Infinity II 高速泵(G7120A)• Agilent 1290 Infinity II 样品瓶进样器(G7129B)• Agilent 1290 Infinity II 高容量柱温箱(G7116B)• Agilent 1290 Infinity II 二极管阵列检测器 (G7117B)• Agilent LC/MSD iQ (G6160AA)将 DAD 与 60 mm 安捷伦最大光强卡套式流通池 (G4212-60007) 配套使用，以使LC/MSD iQ 的 UV 检测获得最大灵敏度。 

样品前处理将选定药物杂质标准品称量至 15 mLFalcon 管中，用甲醇稀释至 1 mg/mL 的工作浓度，然后超声处理约 15 分钟。将100 µL 每种标准品加入 2 mL 螺口样品瓶中，并用 80:20 甲醇/水稀释至 1 mL。用 80:20 甲醇/水进行连续稀释，以制备以下外部校准曲线的浓度：10、5、2.5、1、0.5 和 0.1 µg/mL。OTC 药物样品为片剂，每片对乙酰氨基酚 (API) 剂量为 500 mg。使用甲醇对 API 及其杂质进行简单的液相萃取。将药物片剂置于包含 10 mL 甲醇的 15 mL Falcon 管中，振荡 30 分钟，超声处理约 30 分钟，然后以 4500 rpm 的转速在离心机中离心约 15 分钟。然后，从 Falcon 管中吸取1 mL 最终溶液到 2 mL 螺口样品瓶中进行分析，最终 API 浓度为 50 mg/mL。

Agilent OpenLab CDS使用 Agilent OpenLab CDS 软件进行数据采集、处理和报告。OpenLab CDS 提供法规认证功能，可根据美国 FDA 21 CFRPart 11、欧盟附录 11 及其他类似法规提供数据可靠性支持。1290 Infinity II LC 和LC/MSD iQ 旨在确保 GxP 实验室常规应用中可靠且稳定的 LC/MS 分析。

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结论Agilent LC/MSD iQ 可以轻松检出 OTC 药品中存在的低至皮克级柱上量 (ng/mL)的杂质。分析品牌和仿制 OTC 药中的杂质，并进行对比。该品牌药含有四种可检出杂质：4-氨基苯酚、RC-A、RC-B 和 RC-D，而仿制药含三种可检出杂质：4-氨基苯酚、RC-A 和 RC-B。即使对品牌药的分析显示存在更多检出杂质，但仿制药中这些杂质的浓度更高。两种 OTC 产品均按照 USFDA 指南[3] 生产，且杂质浓度远低于指南中规定的浓度：15 µg/mL 或 0.03% API。在这些浓度下（参见表 4），UV 检测器无法可靠地定量这些杂质。此外，在两种 API 之间观察到的杂质谱差异可以归因于原材料来源以及制造过程中使用的合成和纯化工艺差异。