改善农药分析的峰形并降低 LOQ

摘要本应用简报展示了使用 Agilent 1260 Infinity II Hybrid Multisampler，在安捷伦 FEED进样模式下对溶于强洗脱有机溶剂中的极性农药进行多组分 LC/MS 分析。利用1260 Infinity II Hybrid Multisampler 以各种注入速度注入样品，减轻溶剂效应，并在色谱柱上捕获和富集极性化合物。此技术可消除流穿现象，并提供更出色的峰形，从而改善检测、定量和全自动峰积分。此技术可以应用于在 QuEChERS 样品前处理中使用纯乙腈提取水果和蔬菜中的农药并进行分析的典型多组分分析方法。

前言极性化合物 LC/MS 分析的一个普遍问题是它们的色谱分离受到样品溶剂洗脱强度的影响。随着反相色谱中样品溶剂洗脱强度的提高和进样量的增加，早洗脱极性化合物的出峰性能受到影响，甚至会导致流穿，出现溶剂前沿峰。HPLC 仪器的进样模式也对样品中化合物的分离有很大影响。现代 HPLC 仪器经过充分优化，以尽可能减小扩散体积，从而获得理想的出峰性能。遗憾的是，这种优化使极性化合物在到达色谱柱柱头时更有可能高度聚集在样品溶剂中。为了防止峰分裂或流穿峰，通常利用夹层进样或增加混合器等方式来促进极性化合物进入起始溶剂中。1260 Infinity II HybridMultisampler 可通过 FEED 进样模式输送样品，无需改变流路即可将样品与起始溶剂混合，且不影响出峰性能。此进样模式无需对液相色谱系统进行任何手动干预。1260 Infinity II Hybrid Multisampler 还可以在经典的流通式进样模式下操作：只需在方法设置中单击鼠标即可实现，能够兼容之前的流通式进样方法。前文所述的分析挑战经常出现在蔬菜和水果的极性农药多组分分析中，因为在QuEChERS 样品前处理流程中，农药最终溶于乙腈。

本应用简报展示了新开发的进样原理 FEED进样的应用。此进样模式能够通过样品注入进行溶剂调制，对溶于乙腈等溶剂中的极性农药（这是 QuEChERS 样品前处理后的普遍情况）进行多组分 LC/MS 分析。本文将介绍并讨论通过样品注入进行溶剂调制对出峰性能的积极影响，以及通过增加进样量所获得的最大灵敏度。

实验部分仪器– Agilent 1260 Infinity II HybridMultisampler (G7167C)– Agilent 1260 Infinity II 全能泵(G7104C)– Agilent 1290 Infinity II 高容量柱温箱(G7116B)– Agilent Ultivo 三重四极杆液质联用系统 (G6465B)

色谱柱Agilent ZORBAX StableBond C18,2.1 × 100, 1.8 µm（货号 858700-902）软件– 用于 Ultivo LC/TQ 的 AgilentMassHunter 采集软件 V1.1– Agilent MassHunter 定性分析软件V10.0– Agilent MassHunter 定量分析软件V10.0农药高灭

校准将 8 种农药各自的储备液混合，使浓度达到 1000 ppb。将该溶液用乙腈稀释，得到浓度为 100、20、10、2、1 和 0.2 ppb的一系列校准溶液。样品使用乙腈从草莓中提取的 QuEChERS 提取物：加标了所有农药（加标浓度为10 ppb）以及不加标。样品前处理 

1. 称取 10.00 ±0.01 g 均质草莓样品置于50 mL 离心管中2. 根据需要加标，然后加入 10 mL 乙腈，加盖并涡旋 1.5 分钟 

3. 加入 Agilent QuEChERS 萃取试剂盒，原始方法（货号 5982-5550）萃取盐(4 g) 并涡旋 1.5 分钟 

4. 以 4000 rpm 的转速离心 4 分钟 

5. 将 6 mL 上清液转移至 15 mL AgilentQuEChERS 分散式通用 SPE 管（货号5982-5056）中 

6. 涡旋 1.5 分钟，然后以 4000 rpm 的转速离心 4 分钟7. 将上清液转移到干净的试管中8. 使用 Agilent Captiva 优级针头过滤器（货号 5190-5083）过滤到自动进样器样品瓶中

溶剂和化学品– 所有溶剂均购自德国 Merck 公司– 化学品也购自德国 Merck 公司– 新制超纯水产自配置 LC-Pak Polisher和 0.22 µm 膜式终端过滤器 (Millipak)的 Milli-Q Integral 水纯化系统

结果与讨论为了证明进样模式（即，FEED 进样或流通式进样）的影响，将八种早洗脱极性农药的混合物溶于乙腈中，各化合物的最终浓度为 10 ppb。将此样品以 0.5、1.0、1.5 和 2.0 μL 的不同进样量进样，考察两种进样模式下的出峰性能。图 1 突出显示了两种进样模式下第一个洗脱的农药MRM 定量离子峰形。当进样量为 0.5 μL 时，FEED 进样获得了峰形良好的峰（图 1：A1）。在流通式进样模式下获得的峰也具有良好的峰形，但峰顶略有分裂（图 1：A2）。随着进样量的增加，FEED 进样模式下的峰高增加，同时仍保持出色的峰形（图 1：B1 至 D1）。相比之下，对于流通式进样模式，在进样量为 1.0 μL 时峰开始分裂（图 1：B2）。在1.5 μL 和 2.0 μL 的更大进样量下，农药开始流穿，出现溶剂前沿峰（图 1：C2 至 D2）。在两种进样模式下，进样量为 1.0 µL 和1.5 μL 时采集的 8 种农药的结果如附录图 A 和 B 所示，其中显示了 MRM 定量离子和定性离子峰。在两种进样模式下，在 0.5 μL 的进样量下，洗脱时间晚于的化合物均表现出良好的峰形，且无分裂。但是，在流通式进样模式下，一些峰在 1.0 μL 的进样量下开始分裂（附录：图 A）。当进样量为 1.5 μL 时，所有峰开始分裂或流穿，出现溶剂前沿峰（附录：图 B）。即使是最后一种农药（在大约 3.7 分钟处洗脱），在进样量为 2.0 μL时也开始分裂。