手机版
化工仪器网手机版
化工仪器网小程序
官方微信
公众号：chem17
扫码关注视频号
科诺美 Frontier 生物惰性液相，攻克寡核苷酸 ASO 分析瓶颈
寡核苷酸药物（Oligonucleotide Drugs）是一类以寡核苷酸为基础的治疗药物，主要用于调节基因表达或干扰与疾病相关的RNA分子功能。其中，反义寡核苷酸（ASO）作为技术成熟、应用广泛的核酸药物，全球年销售额就达到约32亿美元，成为基因治疗领域的重要支柱。因此，对寡核苷酸进行高灵敏度和稳定的定性定量分析变得越来越重要。LC-MS/MS由于其优异的选择性和高灵敏度可为寡核苷酸定量分析提供有效帮助。然而ASO硫代骨架是强负电，大分子易金属螯合，容易产生强非特异性吸附，导致LC-MS/MS残留大，高浓度进样后，后续空白持续出峰。针对寡核苷酸药物在色谱端残留大的问题，科诺美推出Frontier生物惰性超高效液相色谱系统（Frontier Bio Inert LC），该系统与质谱仪联用，可以大大减少乃至消除非特异性吸附，有效提高检测精准度；无需钝化处理系统，提高仪器使用效率，为寡核苷酸药物测定提供优质解决方案。
液相方法：
色谱柱：KINETEX 2.6μm EVO C18 100Å 50*2.1mm
流动相：A：水(0.15%DIEA+0.7%HFIP)；
流动相：B：乙腈(0.15%DIEA+0.7%HFIP)
梯度洗脱：0.01-3.0min，5%B-30%B；3.0-5.0min，30%B-100%B；5.0-5.9min，100%B。
流速：0.3mL/min
柱温：40℃
进样量：5μL
质谱方法：
数据采集方法：MRM（多反应监测）
离子源：ESI负模式
气帘气CUR：35psi IS电压：5500V
源温度TEM：550℃ 雾化气GS1：50psi
辅助气GS2：50psi 碰撞气CAD：high
表1 寡核苷酸（ASO）的MRM离子对信息
按照空白-500ng/mL-空白1-空白2的进样顺序编辑序列，运行结束后根据目标峰的峰面积计算500ng/mL浓度之后的第一针和第二针空白的残留水平，结果如表2所示。 Bio inert系统新增多种自动进样器清洗方式，通过增加针清洗和阀清洗等方式残留可降至0.1%以内。
表2 生物惰性Frontier Bio Inert 不同进样器清洗程序仪器残留对比表（以峰面积计算）
将适量寡核苷酸（ASO）用处理后的大鼠血清上清液稀释成浓度为1.0ng/mL，5.0ng/mL，10.0ng/mL，50.0ng/mL，100.0ng/mL，200ng/mL，500ng/mL的标准工作液分别进样分析。寡核苷酸线性结果如图4所示，在1.0ng/mL~500ng/mL范围内线性良好，r2均大于0.999。
图6 寡核苷酸（ASO）的标准曲线结果
将100ng/mL的寡核苷酸（ASO）样品连续进样6次进行重复性考察。保留时间重复性在0.24%-0.26%之间，峰面积重复性在0.84%-1.30%之间。（图7-图10）。
图7 寡核苷酸ASO（ID-1）100ng/mL连续6针重复性结果表
图8 寡核苷酸ASO（ID-2）100ng/mL连续6针重复性结果表
图9 寡核苷酸ASO（ID-3）100ng/mL连续6针重复性结果表
图10 寡核苷酸ASO（ID-4）100ng/mL连续6针重复性结果表
本方案采用科诺美生物惰性超高效液相色谱系统Frontier Bio Inert LC，该系统与质谱仪联用，采用新的自动进样器清洗方式，有效降低寡核苷酸非特异性吸附，线性最高点500ng/mL后空白残留在0.1%以内，在浓度范围1ng/mL-500ng/mL内线性良好，线性相关系数大于0.999，重复性好，满足寡核苷酸药物的精准测定。
免责声明
- 凡本网注明“来源：化工仪器网”的所有作品，均为浙江兴旺宝明通网络有限公司-化工仪器网合法拥有版权或有权使用的作品，未经本网授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经本网授权使用作品的，应在授权范围内使用，并注明“来源：化工仪器网”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
- 本网转载并注明自其他来源（非化工仪器网）的作品，目的在于传递更多信息，并不代表本网赞同其观点和对其真实性负责，不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时，必须保留本网注明的作品第一来源，并自负版权等法律责任。
- 如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起一周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。
最新产品
采购中心
