中药注射液中右旋糖酐的测定-赛默飞CAD

1 引言中药注射剂是在中医药制剂基础上发展起来的一种剂型。虽然在制药过程中进行了处理，但是中药注射剂的不良反应还是大量存在，尤其是近十年来，中药注射剂不良反应的报告呈几何级增加。据统计，2012 年药品不良反应发生共 14 万人次，中药占 14%。中药注射剂又占不良反应中药的 75%。在中药注射剂不良反应的引发因素中，大分子化合物（蛋白质、多糖、鞣质、树脂等）是重要热源物质。大分子容易聚合成更大的分子或多分子团粒，通过静注和肌注的方式进入人体后，导致不良反应的发生。目前，对大分子化合物的检测 2010 版药典采用蛋白沉淀法，方法比较简单，但结果稳定性差，灵敏度低，直接通过视觉的判断很难得到统一有效的结果；针对这些问题，有报道采用高效液相色谱和示差折光检测器对这些大分子化合物进行分析，大大提高了测定结果的稳定性和灵敏度。在此基础上，本文结合 CAD 的优势，发展HPLC-CAD方法测定中药注射剂中的右旋糖酐，并对影响分离检测的各种分析条件进行优化。同时，考察了方法的检测限和重现性。以几种中药注射剂进行实际分析，确定其中的右旋糖苷的分布。

2 样品前处理右旋糖酐 D1、D2、D3、D6、D7 和 D8 对照品：分别用 1 mL 超纯水溶解稀释，混匀后直接进样分析；后提供右旋糖酐 D3 对照品若干，准确称量 3.6 mg，用 1 mL 去离子水溶解混匀，得到 3.6 mg/mL 待测溶液。取 3.6 mg/mL 待测溶液稀释 10 倍，得到 0.36 mg/mL 的 D3 溶液。取 0.36 mg/mL 待测液稀释 10 倍，得到 36 mg/L的 D3 溶液。中药注射剂：样品包括参麦注射剂、热毒宁注射剂、香丹注射剂、丹香注射剂、枯黄注射剂和醒脑静注射剂，分别移取中药注射剂溶液到进样小瓶并进样分析。

● 加入乙腈，能显著提高右旋糖酐的灵敏度，柱后加入 0.1 mL/min 的乙腈，峰面积增加 677%，峰高增加 691%。● 随着加入乙腈流速的增加，峰面积和峰高都有所提高，因此柱后加入乙腈，能够显著增加右旋糖酐的灵敏度。● D8、D7 和 D6 分子量较大的右旋糖酐，乙腈含量增加导致峰形显著变差，所以一般选择 0.1 - 0.2 mL/min的流速加入乙腈

● 流动相中不同的甲酸铵浓度（10、25 和 40 mmol/L 甲酸铵）对响应值的影响。● 随着甲酸铵浓度的增加，右旋糖酐的响应值略有降低。● 25 mmol/L 甲酸铵时的峰面积比 10 mmol/L 甲酸铵时的峰面积降低 2.5%，40 mmol/L 甲酸铵时降低 3.8%。● 在保证分离度和柱效的前提下，降低盐浓度有助于提高检测灵敏度。● 柱前加入乙腈会导致糖的峰形变异，所以在该色谱柱条件下，不建议柱前加乙腈。

● 图 68- 图 73 为不同中药注射剂样品的色谱分离图谱；● 参麦在吐温 80 和 D1 的位置有色谱峰；● 热毒宁、香丹和丹香在 D1 之前没有大分子物质，而在 D1 位置有较大的色谱峰，说明在注射液中有与 D1分子量接近的物质存在；● 苦黄注射液在 D6 和 D1 的位置也有相应的色谱峰，说明注射液中有分子量接近 D6 和 D1 的物质；● 醒脑静注射液在吐温 80 和 D1 的位置有相应的色谱峰；● 因为本实验是基于体积排阻色谱的原理，因此能够说明注射液中有分子量接近的大分子物质存在，具体是什么物质（聚糖、蛋白、树脂等等）还需要进一步确认

5. 前景与展望该方法用体积排阻的原理分离中药注射液中的大分子。在体积排阻色谱中，小分子化合物保留时间比大分子长，有效的排除了小分子化合物对大分子分离检测的干扰。该方法可用于其它溶液中大分子化合物的分离。CAD具有较高的灵敏度，较宽的线性范围。同时，CAD还具有响应与化合物质量相关与化合物结构无关的优点。在右旋糖酐等大分子的定性、定量分析中具有较为明显的优势